ДНК полиомавируса BK

Человеческие полиомавирусы - вирус JC (JCV) и вирус BK (BKV) - распространены повсеместно и не вызывают заболевания у иммунокомпетентных людей. Описана распространенность 86 и 90% специфических антител к JCV и BKV во взрослой популяции, соответственно.

Описаны 4 подтипа BKV; каждый подтип имеет около 5000 пар азотистых оснований, составляющих двухцепочечную ДНК, и гомологию последовательности ~ 70% с JCV4.

Первичная BKV-инфекция встречается в детстве и протекает бессимптомно; после исчезновения инфекции вирус остается в скрытом состоянии, будучи ограниченным почками и мочевыводящими путями. Реактивация BKV происходит в условиях иммуносупрессии, особенно у пациентов с трансплантацией почек, у которых она вызывает полиомавирусную нефропатию (PVAN).

Распространенность этого осложнения у пациентов с трансплантацией варьирует от 1 до 10% и приводит к удалению трансплантата в 60% случаев. Диагноз устанавливается в среднем через 44 недели после трансплантации, с максимальным уровнем заболеваемости на 24 неделе. С введением новых иммунодепрессантов (такролимус, микофенолат мофетил) описана тенденция к увеличению распространенности PVAN2;

Частота возникновения виремии и вирурии БК значительно снижается через 1 год после трансплантации, что снижает риск реактивации. Наряду с PVAN BKV может также вызывать стеноз уретры у пациентов с трансплантацией почки (частота заболеваемости составляет 3%). Наконец, что не менее важно, наиболее распространенным осложнением, связанным с BKV, является геморрагический цистит, который развивается у 10-25% пациентов с трансплантацией костного мозга.

В большинстве случаев вирус БК не связан с нефропатией или геморрагическим циститом. Это указывает на то, что патогенез BKV является результатом нескольких факторов, которые включают: предрасположенность хозяина, повреждение органа-мишени и иммуносупрессию. В начальный посттрансплантационный период тяжелые иммуносупрессивные схемы являются триггером реактивации BKV в почечных клетках; реактивация приводит к продуктивной инфекции и лизису эпителиальных клеток почек.

Клинические проявления нефропатии BKV аналогичны проявлениям отторжения трансплантата, соответственно прогрессирующему повышению уровня креатинина в сыворотке. У некоторых пациентов может быть жар и гематурия

Классически, диагностика BKV нефропатии требует демонстрации цитопатического действия вируса в канальцевом эпителии почечной ткани. Тем не менее, биопсия почки связана с ложноотрицательным показателем до 30% из-за очаговой природы заболевания.

Присутствие крупных ядерных клеток с одним базофильным включающим телом («приманка») в образцах осадка мочи может указывать на инфекцию BKV. Однако положительная прогностическая ценность цитологии мочи низкая, клеточные изменения характерны не только для BKV, но также для JCV и аденовирусов.

По этим причинам текущие рекомендации предусматривают, что в посттрансплантационный период следует проводить мониторинг пациентов с помощью методов ПЦР для выявления BKV-ДНК в моче и крови. Последовательность-мишень специфична для BKV; перекрестные реакции с JCV2 невозможны; 4. Клинически бесшумные вирусы обычно предшествуют PVAN, что позволяет выявлять пациентов с повышенным риском и устанавливать профилактические меры (коррекция дозы иммунодепрессантов) .

Рекомендации по определению БКВ - ДНК - экспресс-диагностика заболеваний почек, связанных с БКВ; мониторинг пациентов с трансплантацией почки для раннего выявления нефропатии с целью снижения иммуносупрессивных доз.

Подготовка пациентов - не требуется.
Собранный образец - а) спонтанный анализ мочи; б) кровь придет.
Контейнер для сбора - а) пробирка для мочи; б) вакутейнер, содержащий ЭДТА в качестве антикоагулянта
Собранное количество - а) минимум 2 мл; б) столько, сколько позволяет вакуум.
Обработка - образцы не будут центрифугированы.
Стабильность образца - образцы мочи и крови стабильны в течение 48 часов при температуре 2-4 ° C до экстракции нуклеиновой кислоты
Метод - ПЦР в реальном времени Light-Cycler: цепная реакция полимеризации с детекцией накопленного продукта ПЦР в режиме реального времени путем измерения испускаемой флуоресценции (качественный тест).
Контрольные значения - BKV - необнаружимая ДНК.
Предел обнаружения - 10 копий / образец.

Интерпретация результатов

Обнаружение BKV-ДНК в моче, связанной с почечной недостаточностью, в соответствующем клиническом контексте устанавливает диагноз BKV-индуцированной нефропатии.

Хотя обнаружение BKV-ДНК в моче является чувствительным тестом у пациентов с геморрагическим циститом, его специфичность низкая, поскольку распространен бессимптомный вирус BK.

Анализ BKV-ДНК в крови более полезен для исключения нефропатии BKV, чем для ее диагностики, поскольку он имеет отрицательную прогностическую ценность 100% и положительную прогностическую ценность только 50%. Однако следует отметить, что BKV обычно не выявляется в крови у пациентов с геморрагическим циститом или стенозом уретры.