Микоплазма(Mycoplasma pneumonia), определение ДНК

Mycoplasma pneumoniae является патогеном, часто участвующим в внебольничной пневмонии, для которой в большинстве случаев характерно коварное атипичное начало(4).
M. pneumoniae - прокариотический микроорганизм с очень маленьким геномом. В отличие от других бактерий, он не имеет клеточной стенки, которая ограничена триламеллярной мембраной, содержащей стерины. Он делится бесполым образом на бинарное деление, причем время удвоения популяции составляет> 6 часов; По этой причине культивирование возбудителя требует длительного времени (5-20 дней) (5.)

М. pneumoniae колонизирует слизистую оболочку дыхательных путей; прикрепление к клеткам слизистой оболочки, уклонение от процесса фагоцитоза и модуляция иммунной системы являются важными элементами для начала заболевания1. Патогенность микоплазмы была связана с активацией медиаторов воспаления, таких как цитокины(4.)

Наиболее распространенным клиническим проявлением является трахеобронхит; Пневмония, которая развивается примерно у трети инфицированных людей, начинается медленно в течение 2-3 недель после воздействия, с лихорадкой, головной болью, фарингитом, постоянным непродуктивным кашлем. Пневмония проходит в большинстве случаев через 2-3 недели, хотя кашель может длиться в течение месяца(1; 4.)

Часто описываются внелегочные проявления инфекции Mycoplasma pneumoniae, которые могут поражать любой орган. Тем не менее, из-за высокой распространенности инфекции среди населения, возможно, что многие из зарегистрированных случаев являются лишь случайной ассоциацией с пневмонией. Внелегочные проявления включают: преходящую сыпь, синдром Стивенса-Джонсона, синдром Рейно, сердечные осложнения (аритмии, изменения ЭКГ - нарушения вождения, застойную сердечную недостаточность), неврологические (энцефалит, асептический менингит, менингоэнцефалит, миелит) стволовой, синдром Гийена-Барре, периферическая невропатия, ЦНС васкулит), опорно-двигательного аппарата (polytralgia, артрит), почек, гематологические (редкие случаи апластической анемии) (5.)

Выращивание микроорганизмов из дыхательных секретов или биологических жидкостей должно быть «золотым стандартом» для диагностики. Тем не менее, культура требует трудоемкой процедуры и специализированных средств массовой информации, которые недоступны в большинстве микробиологических лабораторий.

Высокая чувствительность и специфичность молекулярно-биологических тестов (например, метод ПЦР в реальном времени), которые выявляют специфическую ДНК M. pneumoniae в мокроте, носоглоточном экссудате, аспирате трахеи, жидкости бронхоальвеолярного лаважа или бронхиальном лаваже, показывают, что они может быть основой для быстрого и конкретного диагноза. Наибольшая чувствительность достигается в случае образцов мокроты. ПЦР-тесты можно использовать на любой стадии инфекции, включая ранние стадии, когда серологические реакции отрицательны(4; 5.)

У некоторых пациентов с неврологическими расстройствами (энцефалит, ишемический инсульт), с или без респираторных проявлений, было возможно выделить ДНК М. pneumoniae в CSF, демонстрируя, что патоген способен проникать через гематоэнцефалический барьер и непосредственно проникать в ЦНС; в других случаях с серологией, свидетельствующей о недавней инфекции M. pneumoniae и неврологических расстройствах, не было обнаружено специфической ДНК, что доказывает участие иммунологических, постинфекционных механизмов в возникновении неврологических осложнений(2).

Выделение ДНК M. pneumoniae из крови ограничивается случаями инфекции со значительными системными проявлениями(3).

Рекомендации по определению Mycoplasma pneumoniae - ДНК - выявление инфекций легких и возможных других внелегочных осложнений(3; 4; 5).
Подготовка пациента - не требуется(3).
Собранный образец - а) глоточный или носоглоточный экссудат; б) жидкость, полученная в результате бронхиального лаважа или бронхоальвеолярного лаважа, трахеальной или бронхиальной аспирации, мокроты; в) кровь ЭДТА; г) спинномозговой жидкости, собранной с помощью люмбальной пункции(3).
Сбор - а) сухой буфер (без транспортной среды); б), г) стерильный контейнер; в) вакутейнер, содержащий ЭДТА в качестве антикоагулянта(3).
Собранное количество - б), г) минимум 2 мл; в) столько, сколько позволяет вакуум.
Обработка требуется после сбора- не требуется.
Причины отклонения образца - недостаточное количество для анализа; загрязнение образца; образцы слишком старые(3).
Стабильность образца - образцы стабильны в течение 48 часов при 2-4 ° C до экстракции нуклеиновой кислоты(3).
Метод - ПЦР в реальном времени Light-Cycler: цепная реакция полимеризации с детекцией накопленного продукта ПЦР в режиме реального времени путем измерения испускаемой флуоресценции (качественный тест) (3).
Контрольные значения - Mycoplasma pneumoniae - неопределяемая ДНК(3).
Предел обнаружения - 200 копий / мл(3).

Интерпретация результатов

Обнаружение микоплазм - ДНК в различных патологических продуктах предполагает клинический диагноз инфекции Mycoplasma pneumoniae(3).

Хотя ПЦР является методом, который обеспечивает быструю и надежную диагностику, ложноотрицательные результаты могут возникать в образцах, которые содержат очень мало микроорганизмов. По этой причине для диагностики острой инфекции необходимо провести ПЦР-тест вместе с серологией.

Список используемой литературы
1. Гейл Л. Вудс, Дэвид Х. Уокер. Хламидийные, рикциальные и микоплазменные инфекции. В Генри Клиническая диагностика и управление лабораторными методами - Sauders Elsevier 21-Ed 2007, 1010, 1011
2. Джон Гринли, Ричард Т Джонсон. Неврологические осложнения инфекции Mycoplasma pneumoniae. www.medlink.com. Тип ссылки: Интернет-связь.
3. Синевская лаборатория. Конкретные ссылки на рабочую технологию, использованную в 2010 году. Тип ссылки: Каталог.
4. Майкл Дж. Боно. Пневмония, микоплазма. emedicine.medscape.com, 2010. Тип ссылки: Интернет-коммуникации.
5. Стивен Г. Баум. Mycoplasma pneumoniae и атипичная пневмония. В Mandell, Douglas, and Bennett, Принципы и практика инфекционных заболеваний, 7-е издание, Churchill Livingstone, Elsevier, 2010, 2481-2487.