Бакпосев и определение грибов (с антифунгиграммой, в зависимости от обстоятельств)

Общая информация

Грибы-это эукариотические, одноклеточные или многоклеточные гетеротрофные микроорганизмы, которые содержат хитин в клеточной стенке.

Для классификации грибов морфологический критерий наиболее известен и принят в медицинской микологии.

Это позволяет разделить грибы на три основных типа 6:

1. нитчатые грибы-многоклеточные микроорганизмы с таллом, состоящим из трубчатых нитей, которые можно разделить, называемых гифами;
   левура или дрожжи (это одноклеточные грибы)-одноклеточные микроорганизмы круглой или удлиненной формы, размножающиеся в основном почкованием;
2. диморфные-особая категория микроорганизмов, которые могут появляться в 2 формах в зависимости от условий окружающей среды: форма дрожжей встречается в тканях паразитических организмов или при 37 ° С in vitro, а нитчатая форма возникает при выращивании при комнатной температуре или при 30 ° С на обычных средах.
3. Грибковые инфекции и особенно те, которые вызваны левурами, значительно увеличились в последние годы.

Клиническое значение левуров из патологических образцов:

Граница между патогеном и непатогеном может быть очень трудно определить, что левуры, считающиеся непатогенными 1-2 десятилетия назад, сегодня признаны патогенами у хозяев с ослабленным иммунитетом.

Возникновению конфликта между левуром и хозяином способствует ряд эндогенных или экзогенных факторов, которые либо вызывают у хозяина состояние иммуносупрессии, либо количественно изменяют существующее соотношение между левурами и другими категориями микроорганизмов.

Эндогенные благоприятные факторы представлены: возраст (недоношенные новорожденные, III возраст), конкретные физиологические стары (беременность). Экзогенные благоприятные факторы включают: кортикотерапию, иммунодепрессивную терапию после трансплантации, длительную антибиотикотерапию, длительную эндотрахеальную интубацию, протезы, лучевую терапию.

Левуры могут быть выделены из патологических продуктов, полученных в клинической лаборатории в следующих ситуациях: загрязнение образца ошибочными маневрами в процессе отбора проб, колонизация левуром некоторых поверхностей (покровов, слизистых оболочек) или полостей, заражение этими микроорганизмами.

В случае взятых из обычно стерильных участков наличие левуров указывает на инфекцию, если были приняты все меры по предотвращению загрязнения во время сбора урожая. В случае образцов из нестерильных участков с собственной микробиотой подтверждение клинических, эпидемиологических и лабораторных данных абсолютно необходимо для интерпретации клинической значимости левуров1;2;3.

В зависимости от места изоляции наиболее часто встречающиеся грибы:

1. Спинномозговая жидкость: Cryptococcus neoformans, Candida albicans, Candida parapsilosis, Candida tropicalis, Coccidioides immitis, Histoplasma capsulatum;.
   Кровь: Candida albicans, Candida tropicalis, Candida parapsilosis, Cryptococcus neoformans, Histoplasma capsulatum, Candida Lusitania, Candida krusei, Trichosporon spp., Coccidioides immitis, Malassezia furfur;
2. Мочеполовой тракт: Candida albicans, Candida glabrata, Candida tropicalis, Candida parapsilosis, Penicillium spp., Candida krusei, Cryptococcus neoformans, Histoplasma capsulatum, Cladosporium spp., Aspergillus spp., Trochosporon spp., Alternaria spp.;
3. Дыхательные пути: Candida spp., Aspergillus spp., Alternaria spp., Geotrichum candidum, Fusarium spp., Acremonium spp., Scopulariopsis spp., Трихоспорон spp., Histoplasma capsulatum, Coccidioides imitis;
4. Кожа: Candida albicans, Acremonium spp., Alternaria spp., Aspergillus spp., Scopulariopsis spp., Geotrichum spp., Cladosporium spp. Трихофитон СПП., Epidermophyton flocossum, Microsporum spp., Cryptococcus neoformans1; 2;3; 5.

Сбор и транспортировка образцов-играет важную роль в диагностической точности, любая задержка в обработке образцов может привести к снижению шансов изолировать этиологический агент.

На жизнеспособность левуров может влиять избыточное тепло или холод, рекомендуется, чтобы транспортировка образцов производилась при температуре окружающей среды, и их обработка в кратчайшие сроки (около 2 часов).

Хотя почти любая ткань или жидкость могут подвергаться выделению и идентификации грибов, наиболее важными образцами являются: волосяной фолликул, тегумент, скребок ногтя, секреция половых органов, экссудат глотки, мокрота, транстрахеальная аспирация и плевральная жидкость, ткани из плагиата, спинномозговая жидкость, кровь, моча и фекали1;2;3.

Лабораторная диагностика

В лабораториях Synevo по грибковым инфекциям проводятся два типа анализа: культивирование и идентификация противогрибковых грибов для левуриформных грибов, а также культивирование и идентификация дерматофитных грибов.

В рамках исследования "культура и идентификация грибов с помощью противогрибковой схемы" проводится выделение, в частности, левуров.

Полный диагноз состоит из микроскопического исследования и культуры.

Микроскопическое исследование отслеживает присутствие, форму и размеры левурических образований: бластоспоры, псевдогифы, гифы, возможно, артроспоры. Такие детали, как наличие или отсутствие капсулы, способ впитывания, будут сохранены в качестве важных аспектов для будущей идентификации. У пациентов, проходящих противогрибковое лечение, можно выделить левуры при микроскопическом исследовании в отсутствие их увеличения в культуральной среде.

Культивирование патологических продуктов производится на агаре Сабуро с хлорамфениколом и Гентамицином, средой, которая ингибирует размножение загрязняющих бактерий и обеспечивает хорошее развитие левуров.

В культуральных условиях уровни медицинского интереса развиваются в течение 48-72 часов инкубации, при определенных диагностических подозрениях период наблюдения продлевается до 7 дней.

Температура инкубации после посева согласуется с анатомической областью происхождения образца: 36-37°C для внутренних и глубоких образцов или 30°C для поверхностных образцов.

После получения примокультуры необходимо обязательно проверить ее чистоту, так как бактериальное загрязнение ставит под угрозу последующие этапы идентификации вида. С этой целью проводятся Цветные мазки по Граму, которые будут исследованы под микроскопом с помощью иммерсионной линзы. В случае присутствия бактерий в целях культурной очистки1;3;5;6.

Идентификация культур и определение чувствительности к противогрибковым препаратам

Обычно это делается с помощью стандартизированной биохимической системы, основанной на ферментации 7 сахаров и ферментативном тесте. С помощью этой системы можно идентифицировать следующие виды: Candida spp., Cryptococcus spp., Трихоспорон spp., Saccharomyces cerevisiae, Родоторула.

Для определения чувствительности к противогрибковым препаратам используется вся стандартизированная система, позволяющая тестировать следующие противогрибковые препараты: Амфотерицин В, Нистатин, Флуцитозин, Флуконазол, Кетоконазол, Миконазол, Эконазол.

Для штаммов, которые не могут быть идентифицированы с использованием вышеупомянутой системы, используется другая биохимическая система, основанная на ферментации 13 сахаров и 3 ферментативных тестов, что позволяет идентифицировать следующие виды: Candida spp., Cryptococcus spp., Трихоспорон spp., Saccharomyces cerevisiae, Geotrichum spp. Прототека викерхами.

Определение чувствительности к противогрибковым препаратам для этих видов осуществляется с помощью стандартизированной системы, позволяющей проводить тестирование на: Амфотерицин В, Флуконазол, Кетоконазол, Миконазол, 5-Фтороцитозин, Итраконазол.

Если из патологических продуктов развиваются нитчатые грибы, их идентификация осуществляется на основе макроскопического внешнего вида культуры и микроскопической морфологии плодовых органов. Противогрибковая схема не проводится в случае выделения этих видов грибков4.