Свободные антитромбоцитарные антитела в сыворотке крови

Антитела против тромбоцитов могут быть аутоиммунными (направленными против их собственных антигенов тромбоцитов) или аллоиммунными (направленными против экзогенных антигенов тромбоцитов, например, у беременных женщин или при переливании крови). Аутоантитела почти всегда реагируют с мономорфными детерминантами, а аутологичные тромбоциты являются лучшим материалом для выявления аутоантител. Аллоантитела реагируют с полиморфными антигенными детерминантами, расположенными на поверхности тромбоцитов; они не реагируют с аутологичными тромбоцитами.

Антитромбоцитарные антитела могут быть направлены против ряда антигенных мишеней на плазматической мембране тромбоцитов, которые могут быть антигенами HLA класса I или антигенами, принадлежащими к специфическим гликопротеинам тромбоцитов: GPIIb / IIIa, GPIb / IX и GPIa / IIa. Комплекс гликопротеинов играет важную роль в адгезии тромбоцитов, связывая фибриноген, фибронектин, витронектин и фактор Виллебранда. Гликопротеин Ib / IX является основным рецептором фактора Виллебранда, а гликопротеин Ia / IIa участвует в адгезии коллагена.

Клинические условия, связанные с наличием антител против тромбоцитов:

1. Острая и хроническая аутоиммунная тромбоцитопеническая пурпура (ИТП) - это состояние, характеризующееся выработкой аутоантител, которые разрушают собственные тромбоциты. Большинство антител распознают гликопротеины мембран тромбоцитов, особенно GPIIb / IIIa, GPIb / IX и GPIa / IIa. Антитела, которые распознают эти мишени, могут быть обнаружены с низкой частотой в плазме / сыворотке пациентов с ИТП , но у этих пациентов определенный диагноз состоит в обнаружении аутоантител, связанных с их собственными тромбоцитами, соответственно в обнаружении антител в элюате, приготовленном из аутологичных тромбоцитов. тест, имеющий чувствительность 53% и специфичность 72% для диагностики ITP, согласно недавнему исследованию. Однако тест не может быть выполнен, если тромбоцитопения тяжелая (<10000 / мкл), и в этих случаях могут быть обнаружены свободные аутоантитела.
   У небольшого числа пациентов могут быть аутоантитела к функциональным детерминантам, расположенным в основном на GP IIb / IIIa, что приводит к значительным функциональным нарушениям при наличии нормального количества тромбоцитов, и у некоторых из этих пациентов наблюдался переход к классической ИТП .
   а) Острая ИТП : тромбоцитопения, часто тяжелая (<10000 тромбоцитов / микролитр), начинается остро, через 10-14 дней после вирусной инфекции; он полностью обратим, чаще всего поражает детей в возрасте до 10 лет. Клинически это чаще всего проявляется патчами или посттравматическим кровотечением, кровоизлияние в мозг встречается редко. Острое ИТП иногда может возникать после вакцинации с частотой 1: 25000 детей / год.
   б) хроническая ИТП: с началом в любом возрасте; может быть идиопатическим или вторичным по отношению к таким состояниям, как аутоиммунные заболевания (СКВ) или гематологические злокачественные новообразования (хронический лимфолейкоз); женщины страдают чаще; характеризуется тяжелой тромбоцитопенией, которая редко проходит самопроизвольно
2. Аллоиммунная тромбоцитопения у новорожденных (НАИТ): является тромбоцитарным эквивалентом гемолитической болезни новорожденных (ГБН), являясь наиболее распространенной причиной тяжелой тромбоцитопении у новорожденных в термине, не связанном с сепсисом, инфекциями или гематологическими злокачественными новообразованиями. Распространенность составляет 1: 1000 - 1: 2000 от общего числа новорожденных. В отличие от ГБН, НАИТ одинаково влияет как на первенца, так и на новорожденного при последующей беременности. Как и в случае с резус-несовместимостью, у тромбоцитов у матери отсутствует специфическая антигенная детерминанта (у 2-3% беременных женщин отрицательный показатель HPA-1a), который присутствует у плода и наследуется от отца. Антигены присутствуют на тромбоцитах с 16 недели беременности. НАИТ является результатом материнской аллоиммунизации против антигенов тромбоцитов плода. В результате материнские аллоантитела (особенно типа IgG) проникают через плаценту, вызывая тромбоцитопению и геморрагические проявления у плода / новорожденного в первые часы жизни, что может привести к внутричерепному кровоизлиянию (в 10-25% случаев). В 85-90% случаев материнская аллоиммунизация проводится против тромбоцитарного антигена HPA-1a (антигенная детерминанта, расположенная на GP IIb / IIIa), при этом матери гомозиготны по альтернативному аллелю HPA-1b, за которым следует гораздо более низкая частота анти-HPA- 5b (расположен на GP Ia / IIa) и аллоантитела к антигенным детерминантам на GP Ib / IX. Антитела против HLA также были обнаружены в сыворотке беременных женщин, но они не являются значимыми для НАИТ. Тромбоцитопения исчезает самопроизвольно через несколько недель, не более 3 месяцев. Количество материнских тромбоцитов находится в пределах нормы.
3. Тромбоцитопения новорожденных, вызванная материнскими аутоантителами, характеризуется наличием тромбоцитопении как у матери, так и у новорожденного, у матери с хронической ИТП.
4. Посттрансфузионная пурпура (ПТП) - крайне редкая трансфузионная реакция, которая встречается почти исключительно у женщин среднего и пожилого возраста, примерно через неделю после переливания крови. Тромбоцитопения может быть тяжелой, но обратимой. По непонятным причинам сами тромбоциты разрушаются вместе с перелитыми тромбоцитами. Антигенная сенсибилизация, вероятно, происходила в результате воздействия экзогенных антигенов тромбоцитов во время предыдущих беременностей или переливаний. Он характеризуется высоким титром обнаружения аллоантител против анти-GP IIb / IIIa и наличием аллоантител в элюате, полученном из аутологичных тромбоцитов.
5. Тромбоцитопения, устойчивая к переливанию тромбоцитов - характеризуется фебрильной посттрансфузионной реакцией и неадекватным увеличением (ниже ожидаемого уровня) количества тромбоцитов. Это состояние чаще встречается у пациентов, которые лечатся от злокачественной гемопоэтической болезни. В дополнение к выработке антител против тромбоцитов, другие возможные причины включают сепсис, Распространенная внутрисосудистая коагуляция или вызванную лекарственными средствами тромбоцитопению. Иммуноопосредованная рефрактерная тромбоцитопения чаще вызывается антителами к антигенам HLA3. У этих пациентов обнаружение свободных антител в сыворотке полезно для введения совместимых концентратов тромбоцитов.
6. Лекарственная тромбоцитопения - редкий тип тяжелой тромбоцитопении, связанной с двумя типами антител: лекарственно-зависимыми антителами и аутоантителами. Лекарственно-зависимые антитела реагируют, подобно аутоантителам, с эпитопами гликопротеинов, особенно GP IIb / IIIa или GP Ib / IX, расположенными на аутологичных тромбоцитах или тромбоцитах от здоровых людей, но только до тех пор, пока присутствует лекарство-нарушитель. В некоторых случаях аутоантитела были обнаружены в сыворотке пациентов с индуцированной лекарственными средствами иммунной тромбоцитопенией, чья реакция с тромбоцитами не зависит от присутствия препарата (например, в случае препаратов золота).
   Лекарственные средства, которые чаще всего связаны с тромбоцитопенией с лекарственно-зависимыми антителами: хинидин, триметоприм-сульфаметоксазол (антитела, специфичные для метаболитов лекарственных средств), хинин, диклофенак, карбамазепин, рифампицин, ибупрофен, номифензин, ранитидин, ранитидин.
7. Гепарин-индуцированная тромбоцитопения - тромбоцитопения, связанная с тромбоэмболическими осложнениями, возникающими при лечении гепарином. Распространенность составляет 0,5–2% всех пациентов, получающих нефракционированный гепарин, продолжительностью более 5 дней. Он характеризуется наличием антител, которые реагируют с эпитопами комплекса гепарин - фактор тромбоцитов 4 (PF4).

Рекомендации по выполнению антитромбоцитарных антител:

• Тромбоцитопения, которая не может быть объяснена нарушением тромбоцитопоэза или наличием спленомегалии.
• Различные клинические ситуации, которые могут указывать на наличие антител-индуцированной тромбоцитопении.
• Тромбоцитарные пациенты, которым требуется переливание концентратов тромбоцитов 2.

Свободные антитромбоцитарные антитела
Тест выявляет антитела против HLA класса I, а также специфические антитела против тромбоцитов против комплексов GP IIb / IIIa (HPA-1a, 1b, 3a, 3b, 4a), GP Ib / IX (HPA-2a, 2b), GP Ia / IIa (HPA-5a, 5b) и GP IV4.

Показания: обнаружение наличия аллоантител при неонатальной аллоиммунной тромбоцитопении (НАИТ) - тест должен проводиться как на матери, так и на ребенке; Посттрансфузионная тромбоцитопения.
Подготовка пациента - натощак.
Материал - венозная кровь.
Транспортная среда, пробирка - Vacutainer без антикоагулянта с / или без разделительного геля.
Необходимое количество - столько, сколько позволяет вакуум.
Необходимая обработка после сбора материала - отделите сыворотку центрифугированием, работайте как можно быстрее или охладите (2-8ºC) не более 5 дней или заморозьте при -20ºC. Избегайте повторного замораживания-оттаивания.
Стабильность образца - отделенная сыворотка стабильна в течение 5 дней при 2-8 ° С, 2-3 года при -20 ° С.
Причины отказа от пробы - зараженный бактериями образец, гемолизированный, липемический, желтушный, несоблюдение условий хранения.

Метод - ELISA.

Референтные значения
Анти-HLA класс I - отрицательный
Анти-HPA-1a, 3a, 4a - отрицательный
Анти-HPA-1b, 3b, 4a - отрицательный
Анти-HPA-5a - отрицательный
Анти-HPA-5b - отрицательный
Анти-GP-IV - отрицательный
Анти-HPA-2a, 2b - отрицательный4.

Пределы и интерференция
Наличие иммунных комплексов или других агрегатов иммуноглобулина в сыворотке может привести к ложноположительным результатам.
Антитела с низкой жадностью или низким титром могут давать ложноотрицательные результаты.
Возможно, что аллоантитела, специфичные для других антигенов тромбоцитов на GP IIb / IIIa (HPA-4b, HPA-6a, HPA-6b, HPA-7a, HPA-7b, HPA-8a, HPA-8b), могут реагировать с этим. тестовое задание.
Антитела к антигенам HLA класса I с низкой частотой встречаемости могут быть не обнаружены.
Связанные антитромбоцитарные антитела

Тест выявляет антитела против тромбоцитов (анти-GP IIb / IIIa GP Ib / IX, GPIa / IIa) в элюате, приготовленном из тромбоцитов пациента (аутологичных).
Показания - выявление аутоантител к аутоиммунной тромбоцитопенической пурпуре (ИТП).
Подготовка пациента - натощак.
Метод - венозная кровь.
Транспортная среда, пробирка - Vacutainer с EDTA.
Необходимое количество - для приготовления элюата тромбоцитов требуется минимальное количество тромбоцитов 10000 / мкл (предпочтительно 50000 / мкл), достаточное количество крови получается путем сбора ~ 16 мл крови.
Стабильность образца - 72 часа при 18-22 ° C (образец не будет охлаждаться).
Причины отказа от пробы- зараженный бактериями образец, гемолизированный, липемический, желтушный, несоблюдение условий хранения.
Метод - ELISA4.
Контрольные значения - отрицательные антитромбоцитарные антитела.

Пределы и интерференция

Хотя положительный результат полезен для подтверждения диагноза ИТП (положительное прогностическое значение 90%), отрицательные результаты не обязательно исключают это состояние (отрицательное прогностическое значение 24%). Если есть клиническое подозрение на ИТП, и связанные антитромбоцитарные антитела отрицательны, рекомендуется определить наличие свободных антитромбоцитарных антител в сыворотке пациента.

Библиография
1. Davoren A. Neonatal alloimune thrombocytopenia in the Irish population; a discrepancy between observed and expected cases. In Journal of Clinical Patholog, PubMed articles, April 2002.
2. Kiefel V. Platelet antibodies. In Lothar Thomas Clinical Laboratory Diagnostics, 1998, 854 – 858.
3. Laboratory Corporation of America. Directory of Services and Interpretive Guide. Platelet Autoantibody Panel, Whole Blood. Platelet Antibody Profile, Serum. www.labcorp.com 2010. Ref Type: Internet Communication.
4. Лаборатория Synevo. Конкретные ссылки на технологии работы использованы 2010. Ref Type: Catalog.
5. Margotto Paulo R. Trombocitopenia neonatal in Assistencia ao Recem-Nasciado de Risco, ed.2, 2004