Хламидия, определение ДНК

Хламидия - это небольшой внутриклеточный прокариотический паразит, небольшой по размеру (0,2-1 мкм), который обладает как бактериальными характеристиками (синтезирует РНК и ДНК, имеет грамотрицательную бактериальную стенку и клеточную мембрану, чувствителен к антибиотикам циклинового типа), так и вирус (он размножается только в живых эукариотических клетках, он не может синтезировать свою АТФ, он обеспечивается клетками-хозяевами).

Но он отличается от всех микроорганизмов особым циклом роста, который характеризуется двумя различными формами:

• элементарная корпускула (ЕС), приспособленная к внеклеточному существованию;
•  сетчатая тельца (CR), адаптированная к внутриклеточной среде (внутрицитоплазматическая).

Элементарные тельца очень заразны, и, попадая в организм, они прикрепляются к клеточной мембране и подвергаются эндоцитозу. Внутриклеточно эндосома не сливается с лизосомами, как это обычно происходит с любым интернализованным материалом, при этом хламидиоз остается в фагоцитозированном пузырьке в течение всего его жизненного цикла. Вскоре после входа в клетку ЕС превращается в CR, который больше и не может заразить другие клетки, а бинарный делится внутри вакуолей («внутрицитоплазматические хламидийные включения»). Примерно через 36 часов CR реорганизуется в EC, так что через 48-72 часа вся цитоплазма клетки может быть заменена включениями, содержащими сотни / тысячи EC. Несмотря на то, что цитоплазма клетки почти полностью занята ЭК, функция клетки подвергается минимальному воздействию. Высвобождение элементарных корпускул может происходить путем экзоцитоза включений или лизиса клеток-хозяев. ЭК способны заражать новые клетки либо внутри того же организма, либо у нового хозяина. Таким образом, жизненный цикл C. pneumoniae разделен между элементарными тельцами, которые способны заражать новых хозяев, но не могут размножаться, и сетчатыми тельцами, которые размножаются, но не способны вызвать новую инфекцию.

Последние классификации делят хламидиоз на 4 семьи, из которых наиболее важной в человеческой патологии является семейство. Chlamydiaceae, который содержит два рода:

• род Chlamydia - наиболее важным представителем является C. trachomatis;
• род Chlamydophila - C. pneumoniae, C. psittaci, C. pecorum, C. abortus и т. Д.

Пневмония и бронхит являются наиболее распространенными заболеваниями, связанными с C. pneumoniae. В серии клинических испытаний 10% пневмонии и приблизительно 5% бронхита и синусита у взрослых были отнесены к микроорганизму.

Симптомы инфекции C. pneumoniae неотличимы от других причин пневмонии и включают заложенность носа, кашель, лихорадку и одышку. Большинство случаев пневмонии относительно легкие и не требуют госпитализации. Однако даже в легких случаях полное выздоровление происходит медленно, несмотря на адекватную терапию антибиотиками, а кашель и недомогание могут сохраняться в течение нескольких недель после начала заболевания.

Несколько хронических заболеваний также были связаны с инфекцией C. pneumoniae. У пациентов с респираторными инфекциями C. pneumoniae в анамнезе чаще развивается астматический бронхит, что позволяет предположить, что эти микроорганизмы могут быть важным фактором развития астмы или обострений астмы.
Культуральные методы выделения микроорганизмов трудоемки и требуют много времени; Молекулярное тестирование - это быстрый способ выявления ДНК C. pneumoniae в различных дыхательных путях, что способствует раннему установлению соответствующей антибактериальной терапии3. В недавнем исследовании у детей с респираторными инфекциями чувствительность и специфичность теста ПЦР к диагнозу острой инфекции составили 63,6% и 100%, соответственно.

Рекомендации по определению хламидий - ДНК - обнаружение легочных инфекций3.
Подготовка пациентов - не требуется2.
Собранный образец - а) глоточный или носоглоточный экссудат; б) жидкость, полученная в результате бронхиального лаважа или бронхо-альвеолярного лаважа, трахеальной или бронхиальной аспирации, мокрота2.
Урожайный контейнер - а) сухой буфер (без транспортной среды); б) стерильный контейнер2.
Собранное количество - б) минимум 2 мл2.
Обработка после сбора - не требуется2.
Причины отклонения образца - недостаточное количество для анализа; загрязнение образца; образцы слишком старые2.
Стабильность образца - образцы стабильны в течение 48 часов при 2-4 ° C до экстракции нуклеиновой кислоты2.
Метод - ПЦР Light-Cycler в реальном времени: цепная реакция полимеризации с детекцией накопленного продукта ПЦР в реальном времени путем измерения испускаемой флуоресценции (качественный тест)
Контрольные значения - хламидии - неопределяемая ДНК2.
Предел обнаружения - 200 копий / мл2.

Интерпретация результатов

Обнаружение Chlamydia - ДНК в дыхательных секретах предполагает клинический диагноз инфекции Chlamydia pneumoniae3.

Пределы и помехи

Хотя ПЦР является методом, который обеспечивает быструю и надежную диагностику, ложноотрицательные результаты могут наблюдаться в образцах, которые содержат очень мало микроорганизмов3.

Список используемой литературы
1. Чо-Чоу Куо, Лиза А. Джексон, Ли Энн Кэмпбелл, Дж. Томас Грейстоун, Chlamydia pneumoniae (TWAR), обзоры клинической микробиологии, том 8, № 4, 451–461, 1995.
2. Сыневская лаборатория. Конкретные ссылки на рабочую технологию, использованную в 2010 году. Тип ссылки: Каталог.
3. Маргарет Р. Хаммершлаг, Стефан А. Кольхофф, Петра М. Апфальтер. Chlamydophila (Chlamydia) pneumoniae In Mandell, Douglas, and Bennett, Принципы и практика инфекционных заболеваний, 7-е издание, Churchill Livingstone, Elsevier, 2010, 2467-2474.
4. Синобу Отомо и соавт. Анализ детей с респираторными инфекциями Chlamydophila (Chlamydia) pneumoniae и Mycoplasma pneumoniae с помощью ПЦР-анализа в реальном времени и серологических тестов. In Acta Pathologica, Microbiologica, Immunologica Scandinavica (APMIS), том 116, 477-483, 2008.