- Гематологические исследования
- Биохимические исследования
- Биохимическое исследование крови и мочи
- Специфические белки в сыворотке крови и моче
- Биохимические исследования пункционной жидкости
- Биохимические исследования кала
- Биохимические исследования наследственных нарушений обмена веществ
- Исследования при мочекаменной болезни
- Витамины, микроэлементы, оксидативный стресс
- Жирные кислоты
- Фракция трансферрина при алкоголизме
- Неинвазивные маркеры заболеваний печени
- Химический анализ камней
- Эндокринологические маркеры
- Гормоны, участвующие в углеводном обмене
- Гормоны, участвующие в процессе роста
- Гормоны, секретируемые адипоцитами
- Маркеры фертильности
- Маркеры нормальной / патологической беременности
- Гормоны надпочечников
- Гормоны щитовидной железы
- Нейрогормоны
- Пренатальный скрининг на аномалии плода
- Ренин-ангиотензин-альдостероновая система
- Онкологические маркеры
- Маркеры вирусных инфекций
- Маркеры сердечно-сосудистых патологий
- Исследование анемий
- Маркеры патологии костной системы
- Маркеры аутоиммунных болезней
- Антиспермальные антитела
- Аутоантитела при эндокринных, сердечных, почечных заболеваниях
- Аутоантитела при неврологических заболеваниях
- Аутоантитела при дерматологических заболеваниях
- Аутоантитела при пернициозной анемии
- Аутоантитела при сахарном диабете
- Маркеры аутоиммунных заболеваний печени и желудочно-кишечного тракта
- Маркеры ревматических заболеваний и васкулитов
- Маркеры для наблюдения за развитием и лечением болезней
- Маркеры антифосфолипидного синдрома
- Серологические исследования инфекционных болезней
- Аллергологические и иммунологические исследования
- Молекулярно-биологические исследования
- Цитогенетические исследования
- Микробиологические исследования
- Токсикология
- Цервико-вагинальная цитология
- Гистопатологические исследования
- Uncategorized
Цитохимическое определения пероксидазы в лейкоцитах
Цитохимия основана на микроскопическом исследовании клеточных химических компонентов: нуклеопротеинов, белков, гидратов углерода, липидов и ферментов.
Цитохимические окраски предоставляют информацию о клеточной линии и дифференцировке кроветворных клеток и играют важную роль в оценке гематологических аномалий, особенно в дифференциальной диагностике и классификации злокачественных заболеваний крови.
Один из принципов, который следует учитывать, заключается в том, что положительная реакция всегда ценна, в то время как отрицательная реакция неубедительна. Для уверенности в большинстве случаев цитохимические реакции практикуются с положительным свидетелем реакции 1;2.
Цитохимические реакции |
LAM – M1,M2 |
LAM – M3 |
LAM – M4 |
LAM – M5 |
LAM –M6 |
LAM – M7 |
LAL |
MPO |
+ |
++ |
+ |
– , +/- |
- |
- |
- |
PAS |
– , +/- |
– , + |
– , +/- |
– , + |
+ |
+ |
– , + , ++ |
ANAE |
- |
– , + |
+ |
++ |
+ |
+ |
– , +/- |
– отрицательно ; +/- слабо положительно ; + положительно ;+ + интенсивно положительно
Правильный лабораторный диагноз LAM с подтипами FAB и LAL требует подтверждения данных оптической микроскопии – морфологии и цитохимической окраски – с иммунофенотипированием, возможно, данными электронной микроскопии.
Реакция MPO-это цитохимическая окраска выбора для распознавания гранулоцитарных клеток, ее присутствие представляет собой единственный однозначный маркер миелоидной дифференцировки. Миелопероксидаза-это фермент, расположенный в азурофильных грануляциях клеток гранулоцитарной и моноцитарной серий, а также в специфических грануляциях эозинофилов4.
Клеточные пероксидазы расщепляют насыщенную кислородом воду и выделяют кислород, который окисляет бензидин и генерирует нерастворимое и стабильное золотисто-коричневое соединение, расположенное в цитоплазме пероксидазо-позитивных клеток 1;3.
Рекомендации по определению активности пероксидазы:
- дифференциация острого миелобластного лейкоза (LAM) от лимфобластного (LAL);
- демонстрация тела Ауэра;
- обнаружение снижения активности у субъектов с врожденным или приобретенным дефицитом МПО (при миелодисплазиях)1.
Подготовка пациента-натощак или после приема пищи3.
Собранный образец:
а) капиллярная и/или медуллярная аспирационная кровь-мазки
б) рекомендуется одновременный сбор венозной крови для гемограммы 3.
Причины отклонения образца:
- нефиксированные мазки в течение максимум 8 часов после сбора образца;
- мазки из крови, собранной на EDTA3.
Контейнер для сбора образца:
а) мазки капиллярной крови выполняются непосредственно на предметных стеклах микроскопии;
б) vacutainer с EDTA K3 (фиолетовая крышка), для гемограммы 3.
Собранное количество:
а) 3-5 мазков;
Б) 2 мл3.
Необходимая обработка после сбора образца
Желательно, чтобы фиксация мазков производилась в течение первых 30 минут после сбора урожая. Возможно, это можно сделать в течение первых 8 часов. Фиксирующая смесь: этиловый спирт 9 частей + формол 40% 1 часть. Фиксация рассчитана на 30 секунд, после чего мазки смываются струей водопроводной воды. Фиксированные мазки могут сразу окрашиваться или храниться в течение нескольких дней при комнатной температуре, вплоть до окрашивания3.
Стабильность образца:
- нефиксированные мазки стабильны максимум 8 часов при 18-30ºC;
- фиксированные мазки стабильны в течение 5 дней при температуре камеры3.
Метод-микроскопическое исследование3.
Интерпретация результатов
Гранулы желто-коричневого цвета указывают на наличие активности клеточных пероксидаз. Реакция интенсивна в клетках гранулоцитарного ряда. Положительный свидетель реакции представлен зрелым гранулоцитом-крупными гранулами в цитоплазме и над ядром. Сомнительно, является ли нормальный миелобласт пероксидазо-положительным при оптической микроскопии. Реакция положительная, начиная со стадии промиелоцита; в цитоплазме присутствует множество желто-коричневых гранул, которые иногда маскируют другие цитоплазматические особенности.
Для постановки диагноза острого миелобластного лейкоза (Лам) не менее 3% бластов должны быть пероксидазо-положительными. Миелобласты обычно имеют большие, локализованные и численно уменьшенные гранулы, чем нормальные промиелоциты. Ауэр-тела, возникающие в результате аномального коалесценции азурофильных грануляций, являются сильно пероксидазо-положительными.
Моноциты дают отрицательную или слабо положительную реакцию. Моноблоки при остром моноцитарном лейкозе (LAM-M5) обычно отрицательны, в то время как моноблоки при остром миеломоноцитарном лейкозе (LAM-M4) могут быть слабо положительными.
Лимфоциты и эритроциты не обладают активностью MPO на любой стадии созревания.
В заключение положительная реакция у бластов указывает на миелобластный или миеломоноцитарный лейкоз1; 4; 5.
Границы и помехи
Получение положительной реакции у бластов имеет диагностическое значение при остром миелобластном лейкозе, тогда как отрицательная реакция неубедительна. Результат должен быть подтвержден другими цитохимическими тестами 1.
Библиография