Цитохимическое определения пероксидазы в лейкоцитах

Цитохимия основана на микроскопическом исследовании клеточных химических компонентов: нуклеопротеинов, белков, гидратов углерода, липидов и ферментов.

Цитохимические окраски предоставляют информацию о клеточной линии и дифференцировке кроветворных клеток и играют важную роль в оценке гематологических аномалий, особенно в дифференциальной диагностике и классификации злокачественных заболеваний крови.

Один из принципов, который следует учитывать, заключается в том, что положительная реакция всегда ценна, в то время как отрицательная реакция неубедительна. Для уверенности в большинстве случаев цитохимические реакции практикуются с положительным свидетелем реакции 1;2.

 – отрицательно ; +/- слабо положительно ; + положительно ;+ + интенсивно положительно

Правильный лабораторный диагноз LAM с подтипами FAB и LAL требует подтверждения данных оптической микроскопии – морфологии и цитохимической окраски – с иммунофенотипированием, возможно, данными электронной микроскопии.

Реакция MPO-это цитохимическая окраска выбора для распознавания гранулоцитарных клеток, ее присутствие представляет собой единственный однозначный маркер миелоидной дифференцировки. Миелопероксидаза-это фермент, расположенный в азурофильных грануляциях клеток гранулоцитарной и моноцитарной серий, а также в специфических грануляциях эозинофилов4.

Клеточные пероксидазы расщепляют насыщенную кислородом воду и выделяют кислород, который окисляет бензидин и генерирует нерастворимое и стабильное золотисто-коричневое соединение, расположенное в цитоплазме пероксидазо-позитивных клеток 1;3.

Рекомендации по определению активности пероксидазы:

• дифференциация острого миелобластного лейкоза (LAM) от лимфобластного (LAL);
• демонстрация тела Ауэра;
• обнаружение снижения активности у субъектов с врожденным или приобретенным дефицитом МПО (при миелодисплазиях)1.

Подготовка пациента-натощак или после приема пищи3.

Собранный образец:

а) капиллярная и/или медуллярная аспирационная кровь-мазки

б) рекомендуется одновременный сбор венозной крови для гемограммы 3.

Причины отклонения образца:

• нефиксированные мазки в течение максимум 8 часов после сбора образца;
• мазки из крови, собранной на EDTA3.

Контейнер для сбора образца:

а) мазки капиллярной крови выполняются непосредственно на предметных стеклах микроскопии;

б) vacutainer с EDTA K3 (фиолетовая крышка), для гемограммы 3.

Собранное количество:

а) 3-5 мазков;

Б) 2 мл3.

Необходимая обработка после сбора образца

Желательно, чтобы фиксация мазков производилась в течение первых 30 минут после сбора урожая. Возможно, это можно сделать в течение первых 8 часов. Фиксирующая смесь: этиловый спирт 9 частей + формол 40% 1 часть. Фиксация рассчитана на 30 секунд, после чего мазки смываются струей водопроводной воды. Фиксированные мазки могут сразу окрашиваться или храниться в течение нескольких дней при комнатной температуре, вплоть до окрашивания3.

Стабильность образца:

• нефиксированные мазки стабильны максимум 8 часов при 18-30ºC;
• фиксированные мазки стабильны в течение 5 дней при температуре камеры3.

Метод-микроскопическое исследование3.

Интерпретация результатов

Гранулы желто-коричневого цвета указывают на наличие активности клеточных пероксидаз. Реакция интенсивна в клетках гранулоцитарного ряда. Положительный свидетель реакции представлен зрелым гранулоцитом-крупными гранулами в цитоплазме и над ядром. Сомнительно, является ли нормальный миелобласт пероксидазо-положительным при оптической микроскопии. Реакция положительная, начиная со стадии промиелоцита; в цитоплазме присутствует множество желто-коричневых гранул, которые иногда маскируют другие цитоплазматические особенности.

Для постановки диагноза острого миелобластного лейкоза (Лам) не менее 3% бластов должны быть пероксидазо-положительными. Миелобласты обычно имеют большие, локализованные и численно уменьшенные гранулы, чем нормальные промиелоциты. Ауэр-тела, возникающие в результате аномального коалесценции азурофильных грануляций, являются сильно пероксидазо-положительными.

Моноциты дают отрицательную или слабо положительную реакцию. Моноблоки при остром моноцитарном лейкозе (LAM-M5) обычно отрицательны, в то время как моноблоки при остром миеломоноцитарном лейкозе (LAM-M4) могут быть слабо положительными.

Лимфоциты и эритроциты не обладают активностью MPO на любой стадии созревания.

В заключение положительная реакция у бластов указывает на миелобластный или миеломоноцитарный лейкоз1; 4; 5.

Границы и помехи

Получение положительной реакции у бластов имеет диагностическое значение при остром миелобластном лейкозе, тогда как отрицательная реакция неубедительна. Результат должен быть подтвержден другими цитохимическими тестами 1.

Библиография