Молекулярная диагностика паразитарных заболеваний кишечника - простейшие

Общая информация 

Желудочно-кишечные инфекции представляют собой группу состояний вирусной, бактериальной или паразитарной этиологии, которые чаще всего проявляются как диарейные заболевания. Они передаются преимущественно фекально-оральным путем, и им способствует отсутствие санитарии и плохая личная гигиена, что оказывает гораздо большее влияние на развивающиеся страны. Наиболее распространенными этиологическими агентами диарейного заболевания, о которых сообщается во всем мире, являются ротавирус и кишечная палочка (E. coli), но распространенность этиологии значительно различается в зависимости от локализации, возрастных групп, социально-экономического статуса и т. д. 1.

Диагностика желудочно – кишечной инфекции важна, потому что симптоматика (диарея-жидкий стул, рвота, потоотделение) может иметь серьезные краткосрочные последствия (истощение воды и электролитов в организме) с потенциально смертельным развитием, если не вмешиваться в восстановление гидроэлектролитического баланса. По данным Центра по контролю и профилактике заболеваний (CDC), диарейные заболевания являются второй по распространенности причиной смерти среди детей в возрасте до 5 лет в мире.2

Молекулярная диагностика этиологии желудочно-кишечных инфекций позволяет одновременно тестировать несколько классов патогенов (вирусы, бактерии, паразиты) из одного образца стула и обеспечивает быстрый результат при наблюдении за назначением правильного и целевого лекарства.

Инновационный метод мультиплексной ПЦР в реальном времени позволяет идентифицировать генетический материал (РНК или ДНК) наиболее распространенных патогенов, вовлеченных в желудочно-кишечную патологию, с чистотой, превосходящей традиционные методы, и способностью выявлять коинфекции или инфекции патогенов, которые трудно диагностировать с помощью копрокультуры или компропаразитологического микроскопического исследования.

Использование методов молекулярной биологии не исключает использования традиционных методов, поскольку после идентификации возбудителя показано использование такого метода идентификации для проверки чувствительности к противомикробным агентам (антибактериальным, противогрибковым), а также показано для проверки эволюции после лечения.

Паразиты-простейшие желудочно-кишечные патогены

Кишечные простейшие вызывают диарейные заболевания тяжелых форм у пациентов с ослабленным иммунитетом со значительной заболеваемостью и смертностью как в развитых, так и в развивающихся регионах.

Giardia lamblia

Простейшие Giardia lamblia (G. duodenalis и G. intestinalis), наиболее распространенный кишечный паразит, вызывает лямблиоз, который является одной из наиболее частых невирусных причин диареи среди детей.

Некоторые случаи могут быть бессимптомными; но когда они присутствуют, симптомы включают диарею, вздутие живота, мальабсорбцию, тошноту, рвоту и спазмы в животе. Заражение обычно самоограничивается, но у детей может возникнуть хроническая диарея, вызывающая мальабсорбцию с потерей веса и задержкой роста и развития. Острый лямблиоз может имитировать острый вирусный энтерит, бациллярную дизентерию, острый кишечный амибиаз и воспалительное заболевание10.

Entamoeba histolytica

Entamoeba histolytica является патогенным амибоидным простейшим, для которого человек является основным резервуаром и который вызывает амибиаз, встречающийся в основном в развивающихся странах. Клиническая картина может варьироваться от бессимптомной до желудочно-кишечных заболеваний и инвазивных заболеваний, которые могут негативно повлиять на рост детей. Симптомы включают геморрагическую диарею, усталость, тошноту, лихорадку, потерю веса. Кишечный амибиаз может имитировать инфекционную диарею, воспалительное заболевание кишечника, ишемический колит, дивертикулит, пороки развития AV.

Амибиома может имитировать карциному толстой кишки. Амебные стриктуры могут имитировать венерическую лимфогранулему (хламидиоз) и злокачественные новообразования. Амибиаз печени может имитировать пиогенный абсцесс печени, некротическую гепатому и эхинококковую кисту11.

Cryptosporidium spp.

Cryptosporidium (C. hominis или C. parvum.) является простейшим паразитом медицинского и ветеринарного значения, который вызывает гастроэнтерит у различных позвоночных хозяев. Заражение распространяется фекально-перорально и косвенно через загрязненную воду. Криптоспоридиум является частой причиной эпидемий, передаваемых через пищу и воду. У иммунокомпетентных пациентов заражение самоограничивается. Другие симптомы включают лихорадку, тошноту, рвоту и боль в животе. Симптомы могут быть циклическими. Это может поставить под угрозу жизнь пациентов с ослабленным иммунитетом. Кишечный криптоспоридиоз может имитировать синдром мальабсорбции, лямблиоз и вирусную диарею. Билиарный криптоспоридиоз может имитировать острый холангит12.

Blastocystis hominis

B. hominis населяет подвздошную кишку и слепую кишку, является одним из наиболее распространенных кишечных паразитов, встречающихся у людей и животных, и долгое время считался непатогенным, но есть недавние исследования, подтверждающие его роль патогена. При наличии симптомы включают тошноту, анорексию, боль в животе, метеоризм, острую/хроническую диарею, запор, анальный зуд, усталость, боль в суставах и крапивницу. Это связано с синдромом раздраженного кишечника, что в три раза чаще встречается у этих пациентов13.

Dientamoeba fragilis

D. fragilis-патогенный паразит с мировым распространением, который, как было показано, вызывает острое желудочно-кишечное заболевание (диарея и боль в животе), которое может прогрессировать до хронизации. Хотя многие пациенты протекают бессимптомно, D. fragilis был связан с диареей, болью в животе, тошнотой, потерей веса, анорексией и метеоризмом 14.

Cyclospora cayetanensis

C. cayetanensis-простейшее, поражающее желудочно-кишечный тракт и вызывающее острое диарейное заболевание как у людей с ослабленным иммунитетом, так и у иммунокомпетентных людей. C. cayetanensis был идентифицирован как важная причина эндемичных или эпидемических диарейных заболеваний у детей и взрослых во всем мире.

Циклоспориоз характеризуется обильным, бескровным, водянистым диареей, анорексией, усталостью, потерей веса, тошнотой, метеоризмом, спазмами в животе, миалгией, рвотой и субфебрилляцией. Симптомы начинаются примерно через 7 дней после приема внутрь. Если не лечить, это может занять от недель до месяцев с ремиттирующими и рецидивирующими симптомами. Циклоспориоз может имитировать острый вирусный энтерит и диарею путешественника15.

Рекомендации к тестированию:

• острое диарейное заболевание с кровью в стуле или без нее, спазмы и боли в животе, тошнота и рвота, лихорадка и т. д., которые не проходят при симптоматическом лечении;
• хроническое поражение желудочно-кишечного тракта;
• подозрение на пищевую токсинфекцию;
• люди с установленной желудочно-кишечной симптоматикой после госпитализации;
• пациенты с ослабленным иммунным статусом (например, ВИЧ-инфекция) с подозрением на оппортунистическую патогенную инфекцию (например, Cryptosporidium spp.).

Подготовка пациента - сбор образцов до начала любого антимикробного лечения.

Собранный образец - фекалии в жидкой транспортной среде.

Контейнер для сбора - Fecal Swab

Стабильность образца - образец фекалий, собранных в транспортной среде, стабилен 2 дня при 2-8°C и 1 месяц при -20°C.

Метод-мультиплексная ПЦР в реальном времени.

Будут проанализированы следующие патогены:

Giardia lamblia (GL)
Entamoeba histolytica (EH)
Cryptosporidium (CR
Blastocystis hominis (BH)
Dientamoeba fragilis (DF)
Cyclospora cayetanensis (CC)

Интерпретация результатов, границы и помехи - Результаты теста качественно сообщаются следующим образом:

Необнаружимый

Положительно с сообщением о типе / типах патогенов, присутствующих в образце.

Молекулярная диагностика паразитарные кишечные заболевания-гельминты
Молекулярная диагностика желудочно-кишечные инфекции (вирусы, бактерии, паразиты – - синдромальное тестирование