Электрофорез липопротеинов

Общая информация

Липопротеины содержат гидрофобные липиды, связанные с белками, вместе составляющие водорастворимый комплекс. Они делятся на четыре основных класса в зависимости от размера (по молекулярному весу), плотности (разделение ультрацентрифугированием и флотацией) и электрического заряда (разделение электрофорезом).

Классы липопротеинов:

• Хиломикроны: диаметр 5000Å, плотность от 0,940 до 0,980; откладываются в γ-зоне липопротеинов; состоят из 90% триглицеридов; значительно увеличиваются после приема пищи, образуются в результате проглатывания и кишечной абсобии пищевых липидов; дают опалесценцию сыворотке; составляют 0-2% от количества липопротеинов.
• β-липопротеины или ЛПНП (липопротеины низкой плотности): плотность между 1,019-1,063; мигрируют в зону β-глобулинов; транспортировать липопротеины низкой плотности к периферическим тканям и, в частности, к стенке артерии; они богаты холестерином (45%), и их увеличение связано с сердечным риском – “вредным холестерином”; они составляют около 33-70% от общего количества липопротеинов.
• Preβ-липопротеины или ЛПОНП (липопротеины очень низкой плотности): плотность 0,95-1,006; они более подвижны, чем β-липопротеины, мигрируют на уровень α2-глобулинов, переносят триглицериды, фосфолипиды, холестерин (15%); синтезируются в печени, поскольку они также называются эндогенными хиломикронами;они составляют около 7-24% липопротеинов.

• α-липопротеины или ЛПВП( Липопротеины высокой плотности): плотность между 1,063-1,210; нести белки, фосфолипиды, холестерин (18%, особенно этерифицированные); обеспечивают возвращение в печень (для метаболизма) холестерина из тканей, и особенно из сосудистой стенки -”защитный холестерин”; показатель для оценки сердечно-сосудистого риска; составляет около 10-30% от общего количества липопротеинов.

В дополнение к этим 4 основным типам описаны следующие липопротеины:

• Preα: плотность > 1,210; мигрируют на уровень альбумина; содержат свободные жирные кислоты, и их приблизительное количество составляет 8-13%.
  Дополнительная фракция между α и pre β (между ЛПОНП и ЛПВП), представленная липопротеином a-Lp (a), подвижность которого варьируется в зависимости от фенотипа; состоит из фосфолипидов, холестерина и апопротеина B100, сходных с молекулой плазминогена; вводит ЛПНП в клетки в отсутствие рецепторов; представляет собой независимый фактор риска для процесса атеросклероза; нормальное количество: <30 мг/дл.
• Липопротеины промежуточной плотности IDL (промежуточная плотность липопротеинов): плотность между 1,004-1,010; образуется в циркулирующей плазме в результате ферментативного высвобождения триглицеридов из хиломикронов и ЛПОНП; значительно увеличивается после приема пищи и встречается в сыворотке пациентов с дислипидемией III типа (“широкая бета – болезнь” - BBD).

Частные случаи :

-Повышенная фракция preβ может маскировать Lp( a); поэтому сыворотку 24-48 ч оставляют при температуре окружающей среды, после чего анализ возобновляется.

–Липопротеин X: замена хиломикронов патологической формой липопротеина, мигрирующего к катоду; ЛПНП-подобная структура (содержит триглицериды и свободный холестерин в повышенном количестве); встречается при холестазе и при врожденном отсутствии фермента LCAT (лецитин-холестерин-ацилтрансфераза)

Рекомендации по проведению электрофореза липопротеинов – подозрение на липидные тезауризмы и выявление семейных дислипидемий; ранняя дуга роговицы (пациенты до 40 лет); пациенты с ксантелазмами и ксантомами; значение триглицеридов > 300 мг /дл; липемическая сыворотка натощак; сердечно-сосудистые осложнения (ишемические заболевания и семейный анамнез недоношенной ишемической болезни сердца, артериит нижних конечностей, инсульты, недостаточность кровообращения на вертебро-базилярной территории, HTA); нарушения обмена веществ (сахарный диабет, ожирение, гиперурикемия, гипотиреоз); другие состояния: нефротический синдром, хронический алкоголизм; прием оральных контрацептивов2;3.

Подготовка пациента-Пациент должен придерживаться постоянной диеты в течение 2-3 недель; перед сбором материала пройдет 12-14 часов 5; 6.

Собранный образец-венозная кровь 6.

Контейнер для сбора материала-vacutainer без антикоагулянта с / без сепараторного геля 6.

Необходимая обработка после сбора материала-отделяют сыворотку центрифугированием; проводят электрофорез сразу; если это невозможно, сыворотка держится при 2-8°С.

Примечание: сыворотка не замораживает6.

Стабильность образца-сыворотка стабильна 72 часа при 2-8°C6.

Метод-электрофоретика, с последующим денситометрическим сканированием полученных фракций 6.

Референтные значения:

- хиломикроны: 0-2%;

- беталипопротеины: 38.6-69.4% ;

- пре-беталипопротеины: 4.4-23.1% ;

-Альфа-липопротеины: 22.3-53.3%6.

Предел обнаружения-14 мг / дл: для Альфа-липопротеинов;

- 13 мг / дл: для пре-беталипопротеинов;

- 7 мг / дл: для бета-липопротеинов6.

Интерпретация результатов

После подтверждения клинических данных данными, полученными при электрофорезе липопротеинов, пациенты могут быть фенотипированы по системе классификации Дислипидемиилор Фредериксона 2 ;3 :

Тип	Клинические симптомы	Внешний вид сыворотки	Липиды	Электрофорез	Артериальный риск	Частота%
И Редкий Рецессивный	Боль в животе Сонливость после обеда Эруптивные ксантомы Гепатоспленомегалия Панкреатит	Молочный	Colest. N/↑ TG↑↑↑ (обычно >2000 mg/dl)	Хиломикроны ↑↑↑ LDL : N VLDL: N HDL: N/↓	0	1
Название-Семейная гипертриглицеридемия, вызванная жиром (дефицит липопротеинлипазы)

Тип	Клинические симптомы	Внешний вид сыворотки	Липиды	Ультрацентрифугирование	Электрофорез	Артериальный риск	Частота %
II a Часто Доминантный	Сухожильные ксантомы Множественные атеромы с ранним началом	Прозрачная	Colest. ↑↑↑ (300-600mg/dl) TG: N	LDL↑↑↑	βLP-LDL↑↑↑ Хиломикроны 0 VLDL: N HDL: N/↓	+++	30
Название - гиперхолестеринемия (гипербеталипопротеинемия) наследственная

Тип	Клинические симптомы	Внешний вид сыворотки	Липиды	Ультрацентрифугирование	Электрофорез	Артериальный риск	Частота%
II b Часто	Сухожильные ксантомы	прозрачная/ немного мутная	Colest. ↑↑ 300-600mg/dl) TG↑ (<= 400 mg/dl)	LDL↑ VLDL↑	βLP-LDL↑↑ preβLP-VLDL↑ Хиломикроны 0 HDL: N/↓	++	28
Название-гиперхолестеринемия с гипертриглицеридемией (смешанная/комбинированная гиперлипидемия) (при повышенном потреблении)

Тип	Клинические симптомы	Внешний вид сыворотки	Липиды	Ультрацентрифугирование	Электрофорез	Артериальный риск	Частота %
III Редкий	Ксантомы всех типов Диабет в 1/3 случаев Атеромы	прозрачная/ мутная/ молочная	Colest. ↑↑ 300-600mg/dl) TG↑↑↑ (200-1000 mg/dl)	IDL:↑	βLP-LDL ↑↑ , (вид “запотевший”) pre βLP-VLDL↑↑ Хиломикроны 0 HDL: N/↓	++	1
Название-наследственная болезнь широкой бета-фракции ("широкая бета-болезнь”) (гипертриглицеридемия, вызванная углеводами, с гиперхолестеринемией)

Тип	Клинические симптомы	Внешний вид сыворотки	Липиды	Ультрацентрифугирование	Электрофорез	Артериальный риск	Частота %
IV Часто	Ожирение Ксантомы Диабет в 1/2 случаев Гиперурикемия Атеромы	мутная	Colest. N/↑ TG↑↑↑ (500-1500 mg/dl)	VLDL↑	preβLP-VLDL ↑↑↑ Хиломикроны 0 LDL: N HDL: N/↓	+	40
Название-наследственная Гиперпребеталипопротеинемия (гипертриглицеридемия, вызванная углеводами, без гиперхолестеринемии

Тип	Клинические симптомы	Внешний вид сыворотки	Липиды	Ультрацентрифугирование	Электрофорез	Артериальный риск	Частота %
Х Редко	Ожирение Диабет Гиперурикемия	молочная	Colest. ↑↑ (250 -500mg/dl)TG↑↑↑(500-1500 mg/dl)	Хиломикроны ↑ VLDL↑	Хиломикроны ↑↑↑ preβLP- LDL: N HDL: N/↓	+	<1
Название-наследственная Гиперпребеталипопротеинемия (гипертриглицеридемия, вызванная углеводами, без гиперхолестеринемии

Границы и помехи – в таблице ниже показано влияние вторичных факторов на результаты, полученные при электрофорезе липопротеинов3:

Факторы влияния	Хиломикроны	VLDL	LDL	HDL
Гиперкалорический режим	-	↑	(↑)	↓
Алкоголь	-	↑	Н	↑
Углеводы	-	↑	Н	↓
Никотин	-	↑	↑	↓
Гипотиреоз	-	↑	↑	↑
Эстрогены (беременность)	-	↑	↑↓	↑
Факторы влияния	Хиломикроны	VLDL	LDL	HDL
Прогестерон	-	↓	↑	↓
Глюкокортикоиды (синдр. Кушинг)	-	↑	↑	↑↓
СПИД	-	↑	↓	-
Холестаз	-		Lp-X	-
Хронический гепатит	-	↑↓	Н	↓
Гепатома	-		↑	↓
Нефротический синдром	-	↑	↑	↓
Почечная недостаточность	-	↑	Н	↓

• Лекарства: электрофоретический путь может быть искажен: аспарагиназой, гепарином. Также могут быть лекарственные вмешательства: диуретики, бетаблоканты, антагонисты кальция, ретиноиды, Циметидин, тамоксифен4.

Библиография

1. Frances Fischbach. Chemistry studies. In A Manual of Laboratory and Diagnostic Tests, Lippincott Williams & Wilkins, USA, 8 ed. 2009, 459, 461-462.

2. Jacques Wallach. In Interpretarea testelor de diagnostic, Editura Stiintelor Medicale, Bucuresti, 7 ed. 2006, 687–707.

3. Lothar Thomas. 1998. Plasma proteins. In Clinical Laboratory Diagnostics, TH-Books, Frankfurt/Main, Germany 1998, 170–184.

4. Norbert W Tietz. General Clinical Tests. In Clinical Guide to Laboratory Tests, W.B.SAUNDERS, USA, 3 ed. 1995, 402-403.

5. David Jacobs, Lowell Tilzer. In Laboratory Test Handbook. Lexi-Comp Inc. Jaffe, USA, 3 Ed., 1994, 281.

6. Laborator Synevo. Referintele specifice tehnologiei de lucru utilizate 2010. Ref Type: Catalog.