Микологическое прямое микроскопическое исследование

Общая информация

Дерматофиты вызывают инфекции, поражающие поверхностные участки тела: которым для питания нужен кератин и которые для выживания должны жить на роговом слое кожи, волосах или ногтях.  Хотя они чаще всего считаются "тривиальными заболеваниями", высокий уровень заболеваемости и последствия местного и психического порядка могут быть очень важны для пациентов 4.

Основные этиологические агенты, участвующие в производстве дерматомикоза, принадлежат к родам Epidermophyton, Microsporum и Tricophyton1.

По своему происхождению дерматофитные грибы делятся на 3 категории 4:

• антропофильные виды, которые передаются напрямую через межчеловеческий или косвенный контакт через загрязненное белье или предметы;
• зоофильные виды, которые передаются человеку при контакте с инфицированным животным;
• теллурические виды, которые передаются при контакте почвы с поражениями кожи;

Дерматофитные грибы индивидуализируются по крайней мере двумя признаками, непосредственно влияющими на их идентификацию в клинической лаборатории:

• они используют кератин в качестве питательного элемента • источника азота), что объясняет их тропизм к эпидермису, волосам и ногтям; они обычно не могут проникать в подкожную ткань;
• имеет определенные морфологические признаки: гифы в форме люстры, рога оленя, иногда спиральные и характерные макрокониды, полностью отличающиеся от других грибков2.

Род Tricophyton способен проникать в волосы, эпидермис и ногти, в то время как род Microsporum поражает только волосы и эпидермис, а род Epidermophyton поражает эпидермис и ногти. Основные виды дерматофитов, выделенные из клинических образцов, относятся к частотному порядку: Tricophyton rubrum, Tricophyton mentagrophytes, Epidermophyton flocossum, Tricophyton tonsurans, Microsporum canis и Tricophyton verrucosum1.

Кожные микозы, вероятно, являются наиболее распространенными грибковыми инфекциями у людей и обычно называются латинским термином tinea (“кольцевой червь”). Макроскопически поражение имеет кольцевой вид, его край составляет область активной прогрессирующей инфекции; заживление происходит в центральной части кольца. Для обозначения пораженной области тела также используются латинские термины: tinea corporis (тело), tinea cruris (паховая область), tinea capitis (кожа головы, волосы), tinea barbae (борода), tinea unguium (ногти)3,4.

Поскольку лечение дерматомикоза является длительным, дорогостоящим и потенциально токсичным, необходимо сначала с уверенностью установить диагноз на основе микологического обследования. Это необходимо, потому что существует множество состояний, связанных с дерматологическими поражениями, аналогичными тем, которые вызваны дерматофитами:

• псориаз;
• экзема (вульгарная, атопическая или контактная);
• интертриги различной этиологии;
• оникодистрофии при некоторых состояниях: псориаз, хроническая венозная недостаточность нижних конечностей, генодерматозы;
• плоскоклеточный стрептококк кожи головы 1;2; 3.

Сбор образцов

Образцы, из которых требуется идентифицировать дерматофиты, представлены эпидермальным соскобом, ногтями или волосами. Сбор образцов с поражений осуществляется путем соскоба части эпидермиса или ногтя, как можно ближе к здоровой ткани, с помощью скальпеля или лезвия микроскопа; пораженные волоски берутся путем выщипывания пинцетом. Перед проведением микроскопического исследования и посева образцы будут помещены в стерильные контейнеры и доставлены в лабораторию; они ни в коем случае не будут храниться в холодильнике 1;3.

Микроскопическое исследование

Прямая микроскопия исследует чешуйки или волоски во влажном препарате, установленном между лезвием и пластинкой с калий гидроокись 20 % раствор (KOH). Оставьте препарат в покое примерно на 30 минут для разбавления. Для осветления образцов ногтей будет использоваться более концентрированный раствор Кох (25%). Сначала он исследуется с небольшой линзой, после чего большая линза будет использоваться для морфологических деталей. Они следуют:

- чешуйки для представления фрагментов септированных, разветвленных гиалиновых гиф и артроконидий;

- волоски, чтобы оценить инвазию эктотрикса или эндотрикса; размер артроконидиев ориентирует диагноз2; 3,4.

Волосы, зараженные некоторыми дерматофитами, производят характерную УФ-флуоресценцию, проходящую через стекло-фильтр Вуда, эту ярко-зеленую флуоресценцию можно визуализировать только в затемненной комнате. Следует помнить, однако, что только некоторые из дерматофитов, способных проникать в волосы, могут вызывать явление флуоресценции (M. audouini, M. ferrugineum, M. canis). Следует также отметить, что только полностью вторгшиеся части стержня развивают флуоресценцию. При недавних инфекциях возможно, что флуоресцентная часть волос не покинула фолликул, чтобы ее можно было обнаружить. По этой причине простое исследование флуоресценции с высвобождением отрицательного результата неверно 4.

Изоляция в чистой культуре

Для посева патологического материала на культуральных средах сначала фрагментируют паразитические щетинки, чешуйки, ногтевой материал, а затем инокулируют на поверхность сред, по крайней мере, в четырех точках и в двух трубках, чтобы иметь достаточные шансы на получение положительной культуры. Образцы помещают на две жидкие среды с обогащающей ролью (жидкая среда Сабуро и BHI) и две твердые среды (питательная среда Сабуро с хлорамфениколом + Гентамицином и Микозельным агаром).

Инкубация проводится при 30°C в течение 30 дней, прежде чем они будут считаться отрицательными. Большинство дерматофитных грибов растут после 7-14 дней инкубации.

Положительные культуры требуют проведения субкультур. Они представляют преимущество в быстром росте, колония имеет гораздо больше возможностей для развития и позволяет оценить макроскопический внешний вид аверса/реверса, необходимый для окончательной идентификации.

Микологическая диагностика проводится путем корреляции времени, необходимого для развития колонии, макроскопического аспекта культуры и микроскопической морфологии плодовых органов3,4.

Интерпретация результата

Полное микологическое исследование требует корреляции результата, полученного при микроскопическом исследовании, с результатом дерматофитной культуры. Возможно, что прямое микроскопическое исследование является отрицательным в присутствии положительной культуры, поскольку культурная среда способствует развитию дерматофитов.

Посевы будут отслеживаться в течение 30 дней до сообщения отрицательного результата. В случае положительного результата будет указан род, к которому относится изолированный дерматофит3