Иммуноцитодиагностическое тестирование CIN2 + (CINtec® PLUS)

Иммуноцитодиагностический CIN2 + (CINtec® PLUS)-это двойной иммуноцитохимический прогностический диагностический тест, используемый для качественной оценки клеточной коэкспрессии белков p16INK4a и Ki67 на цервико-вагинальном цитологическом материале. Этот тест позволяет идентифицировать с высокой чувствительностью (94%)1 и специфичностью (97,5%)1 риска прогрессирования до интраэпителиальных поражений шейки матки высокой степени (CIN2+)1,2.

Белок p16INK4a участвует в контроле клеточного цикла, инициируя механизм блокирования деления клеток путем замедления прогрессирования фазы G1 в фазу S. Таким образом, обычно белок p16INK4a действует как фактор-супрессор опухоли, блокируя неконтролируемое размножение клеток, инфицированных ВПЧ. При стойких инфекциях ВПЧ происходит синтез вирусных онкопротеинов E6 и E7, которые инактивируют гены-супрессоры опухолей p53 и RB, что приводит к нестабильности генома эпителиальных клеток и неконтролируемой пролиферации acestora3.

Онкопротеин E7 ингибирует функцию белка ретинобластомы (pRB) и его способность связывать фактор транскрипции E2F, что приводит к накоплению (сверхэкспрессии) белка p16INK4a, который становится иммуноцитохимически обнаруживаемым. Сверхэкспрессия p16INK4a отмечает критический момент онкогенной трансформации клеток с инфекцией ВПЧ и используется в качестве биомаркера предраковых и раковых поражений шейки матки 4.

Белок Ki67 является маркером пролиферации клеток и экспрессируется в ядре пролиферативных клеток (e.G. клетки парабазального слоя нормального шейного эпителия). Ассоциация в одной клетке экспрессии p16INK4a и Ki67 указывает на нарушение клеточного цикла как на прямую метку онкогенной активности ВПЧ и представляет собой объективный критерий для отбора пациентов с высоким риском повреждения шейки матки высокой степени тяжести С целью кольпоскопической оценки.

Рекомендации по тестированию включают:

• пациенты с цервико-вагинальным цитопатологическим исходом типа без HSIL;
• пациенты с положительным результатом генотипирования ВПЧ для штаммов высокого риска.

Подготовка пациентов
- За 24-48 часов до сбора образца следует избегать: половых сношений, вагинального промывания, других интравагинальных процедур (гели, кремы, противозачаточные средства, дезинфицирующие средства, смазочные материалы) или других интравагинальных маневров (интравагинальные тампоны, вагинальное исследование).
- Рекомендуется сбор урожая вне менструального цикла, в середине менструального цикла, а в случае инфекций-после их лечения.
-В случае медико-хирургических процедур рекомендуется собирать урожай перед ручным осмотром, до или как минимум через 24 часа после холпоскопии с применением уксусной кислоты, через 3 месяца после предыдущего сбора урожая, а в случае электрорезекции полипэктомии, как и в послеродовом периоде, должен быть интервал 1.5-3 месяца.

Собранный образец
- Клетки экзоцервикальной, эндоцервикальной и переходной зоны между ними (зона трансформации).

Образец
- Проводится с помощью съемной цервикальной щетки с головкой, в контейнерах SurePath, предназначенных для сбора урожая для цервико-вагинального цитопатологического исследования Бабеш-Папаниколау в жидкой среде.

Стабильность образца
- Срок хранения жидкой среды без собранного образца составляет 36 месяцев с даты изготовления при комнатной температуре (15-30 ° C). После сбора образца с клеточным материалом можно хранить 6 месяцев при 2-10 ° С или 4 недели при комнатной температуре (15-30°с).

Причины отказа от образца
- Неправильный образец: поврежденный флакон, отсутствующая/недостаточная транспортная среда, отсутствие во флаконе уборочного конца щетки.
- Не помеченный образец, неполный лист - без полных клинических и идентификационных данных пациента.

Метод - Иммуноцитохимическая предварительная обработка клеточный материал осуществляется в полностью автоматизированной системе, аналогично препаратам для цервико-вагинального цитопатологического исследования Бабеш-Папаниколау в жидкой среде и включает разделение детритов, калибровку эпителиальной клеточности и обработку до окрашивания.

Иммуноцитодиагностическое тестирование CIN2 + (CINtec® PLUS) проводится в полностью автоматизированной системе с использованием комплекта с предварительно разработанными диагностическими решениями, позволяющими одновременно обнаруживать иммуноцитохимические два белка. Этапы обработки включают антигенную демаскуляцию, ингибирование активности эндогенной пероксидазы, инкубацию с двумя первичными антителами и запуск двух систем визуализации иммуноцитохимических реакций в двух разных цветах. После обработки лезвия с тестируемым цитологическим материалом устанавливаются под двумя монтажными средами. Оценка лезвий проводится с помощью оптического микроскопа, независимо от морфологии клеток.

Интерпретация результатов
Иммуноцитодиагностический тест CIN2 +(CINtec® PLUS) интерпретируется как положительный, когда существует по крайней мере одна клетка, экспрессирующая оба белка одновременно, p16INK4a и Ki67. На сверхэкспрессию p16INK4a указывает положительная цитоплазматическая реакция (коричневый цвет), а на сверхэкспрессию Ki-67 указывает ядерная иммуноцитохимическая реакция (красный цвет). Двойной иммуноцитохимический сигнал свидетельствует о нарушении регуляции клеточного цикла на фоне изменений в клеточном геноме и указывает на эволюционный потенциал для поражения высокой степени тяжести.

Границы и помехи
- Несоблюдение показаний относительно подготовки пациентов, техники сбора урожая и условий стабильности образцов может отрицательно повлиять на количество и качество анализируемого клеточного материала.
- Отсутствие контрцветной оптимизации гематоксилином не позволяет правильно интерпретировать результаты.
- Результат Иммуноцитодиагностического тестирования CIN2 + (CINtec® PLUS) должен быть интегрирован в контексте клинической картины.