Тест трансформации лимфоцитов (LTT) Chlamydia trachomatis

LTT выделяет антиген-специфические Т-лимфоциты памяти в крови. В случае инфекций используются лизаты или части компонентов возбудителей.

Положительный LTT показывает, что пациент сенсибилизирован к соответствующему патогену в результате естественной инфекции или вакцинации.

С другой стороны, отрицательный LTT, в случае клинической острой инфекции или доказанный путем выделения патогена, указывает на специфический дефект иммунной защиты от этого агента. Эта ситуация может быть конституциональной (например, негативная реакция на Candida albicans в случае хронического кожно-слизистого кандидоза) или приобретенной в ходе иммунодепрессивной терапии, а также при противоопухолевой химиотерапии/лучевой терапии.

Очень важно, что LTT специфичен для латентных инфекций (например, вызванных ЦМВ, ВЭБ или вирусами герпеса 1 и 2), потому что обычные антитела положительны всю жизнь и часто не могут серологически отличить латентную инфекцию от активной инфекции.

После первичной инфекции этим патогеном LTT становится положительным. Интенсивность реакции дает нам подсказки о текущем воздействии иммунной системы (реактивация).

Другим важным показанием для специфического LTT являются потенциально стойкие инфекции,например, вызванные Chlamydia trachomatis, Yersinia или Borrelia burgdorferi1.

LTT-Borrelia

Боррелиоз Лайма-это мультисистемное состояние, которое может вызывать широкий спектр клинических проявлений. Только мигрирующая эритема, возникающая в месте укуса головы, является патогномоничной для инфекции, и она развивается только у 60% пациентов. Все другие экстракожные проявления могут быть обнаружены при самых разных состояниях, поэтому диагноз является проблематичным.

Обычное лабораторное тестирование основано на обнаружении гуморального иммунного ответа на антигены, специфичные для боррелии, и обычно включает две стадии:

- скрининг иммуноферментным методом;

- подтверждение положительных и двусмысленных результатов методом вестерн-блоттинга.

Хотя серологические тесты подтверждают инфекцию, они не могут определить, активна ли инфекция и, следовательно, требует лечения. Кроме того, серогические результаты отрицательны на ранней стадии инфекции, антитела могут сохраняться в течение длительного периода, несмотря на эффективное лечение, и, что не менее важно, межлабораторные результаты могут быть противоречивыми. С другой стороны, методы, основанные на культуре и молекулярной биологии, хотя и имеют высокую специфичность, демонстрируют ограниченную чувствительность.

За последние два десятилетия несколько групп исследователей попытались улучшить диагностику боррелиоза, оценив клеточный иммунный ответ, специфичный для Borrelia burgdorferi, с помощью нескольких вариантов LTT.

В тесте, проведенном в нашей лаборатории, используются 3 эндогенных антигена (Borrelia burgdorferi sensu stricto, Borrelia afzelii и Borrelia garinii), полученные из бактериальных лизатов вместе с рекомбинантным антигеном OspC. Проверка теста была проведена на 180 субъектов:

- 100 здоровых серонегативных людей;

- 36 ВИЧ-положительных здоровых людей;

- 44 серопозитивных пациента с клиническими проявлениями заболевания.

Чувствительность теста LTT при клиническом проявлении боррелиоза до введения антибиотикотерапии составила 91%, а специфичность-94%. В этих случаях положительный тест LTT указывает на текущее воздействие патогена на иммунную систему и тем самым активную инфекцию.

В другом исследовании 820 пациентов с клиническим подозрением на боррелиоз результаты серологических тестов и LTT были согласованы в 77.3% случаев. В общей сложности 165 пациентов (20.1%) имели положительную серологию и отрицательную LTT; в большинстве случаев эти пациенты проходят лечение антибиотиками при боррелиозе. 21 пациент с отрицательной серологией (2.6%) получил положительный результат LTT; 7 из них проявили мигрирующую эритему. После лечения антибиотиками LTT он отрицал или становился двусмысленным у пациентов с боррелиозом на ранней стадии, тогда как у пациентов на поздней стадии заболевания LTT он оставался положительным, но с регрессом индекса стимуляции SI. Одногодичный мониторинг 6 пациентов, получавших лечение на ранней стадии, выявил только один случай реактивации инфекции по сравнению с 8 из 10 пациентов, получавших лечение на поздней стадии заболевания, у которых наблюдались частые реактивации и стойкий положительный LTT, соответственно.

На основе этих данных можно сформулировать показания теста LTT-Borrelia:

* клиническое подозрение на боррелиоз у пациентов с неубедительной серологией, чтобы различать активную инфекцию и серологический "шрам" и, таким образом, установить необходимость лечения;

* мониторинг терапевтического ответа через 6-8 недель;

* подозрение на реактивацию инфекции2.

Собранный образец-венозная кровь1.

Контейнер для сбора образца-vacutainer с гепаринатом лития; vacutainer без активатора гелевого антикоагулянта 2.

Объем образца – 20 мл гепаринатной крови и 5 мл сыворотки1.

Стабильность образца-кровь должна прибыть в течение максимум 24 часов в лабораторию, в которой проводится тест, и в течение этого периода она хранится при комнатной температуре; противопоказано охлаждение образца 1.

Причины отторжения образца-образцы, которые превысили диапазон стабильности, охлажденные или замороженные образцы1.

Метод-включение радиоактивного нуклеозида (тимидина) в клеточную ДНК 1.

После стандартизации и проверки мы в настоящее время можем предоставить следующие конкретные LTT:

Ltt Candida-в случае подозрения на иммунный дефект (отрицательный результат LTT) или активную хроническую инфекцию (положительный результат LTT с высокими значениями SI)

Для скрытых инфекций

LTT-вирус герпеса 1 (ВПГ 1, герпес губный)

LTT-вирус герпеса 2 (ВПГ 2, генитальный герпес)

Тест трансформации лимфоцитов (LTT) вирус Эпштейн-Барр

LTT-цитомегаловирус (ЦМВ)

LTT - вирус ветряной оспы (VZV)

Для потенциально стойких инфекций

LTT-Borrelia

Тест трансформации лимфоцитов (LTT) Chlamydia trachomatis

Тест трансформации лимфоцитов (LTT) Иерсинии

Тест трансформации лимфоцитов (LTT) Giardia lamblia

Интерпретация результатов

Интенсивность реакции LTT определяется индексом стимуляции (значение SI):

SI <2 = отсутствие реактивности, отсутствие сенсибилизации

И между 2 и 3 = неопределенная реакция, сенсибилизация небезопасна

И между 5 и 10 = явно положительная реакция, средняя сенсибилизация

И между 10 и 20 = интенсивная положительная реакция, четкая сенсибилизация, возможное текущее воздействие патогена

И более 20 = сильно положительная реакция, очень вероятно, что речь идет о текущем воздействии иммунной системы на патоген (острая инфекция).

Неубедительный результат возникает в ситуации, когда критерии проверки либо положительного контроля (отсутствие поликлональной активации лимфоцитов), либо отрицательного контроля (увеличение спонтанной пролиферации) не были получены. При условии, что сбор и транспортировка образца проводились в соответствующих условиях, отсутствие проверки теста может быть связано с:

- длительное лечение иммунодепрессантами;

- увеличение спонтанной пролиферации в результате гиперактивности иммунной системы 1.