Лейденская мутация гена фактора V

Тромбофилия является наследственным или приобретенным состоянием, связанным с индивидуальной предрасположенностью к тромботическим явлениям.

Основными клиническими проявлениями тромбофилии являются: тромбоэмболические заболевания, периодические невынашивания беременности с неопределенной причиной, осложнения беременности (преэклампсия, задержка внутриутробного развития, апоплексия матки и матки, гибель плода в утробе матери, преждевременные роды), острые коронарные синдромы (нестабильная стенокардия) , асептический некроз головки бедренной кости.

Тромбофилию следует подозревать в следующих клинических ситуациях: тромботические явления у молодых пациентов (<50 лет), рецидивирующий тромбоз, семейные анамнезы тромбоэмболических расстройств, осложнения многоплодной беременности, венозный тромбоз в «необычных» анатомических областях: воротная вена, печеночные вены, мезочастицы церебральный и т. д.

До 70% пациентов с диагнозом формы тромбофилии имеют один или несколько основных генетических дефектов. Из них фактор Лейдена V и мутация протромбина G20210A являются причиной более половины случаев наследственной тромбофилии. Эти мутации были обнаружены относительно недавно (с 1994 года) и основаны на уникальных нуклеотидных заменах, которые в настоящее время могут быть обнаружены молекулярными методами6.

Лейденский фактор V является аномальным вариантом фактора V, который становится устойчивым к действию активированного белка C (APC). Он генерируется точечной мутацией в гене синтеза хромосомы 1q23, кодирующего фактор V, путем замены гуанина (G) на аденин (A) в положении 1691. В белковом продукте нуклеотидная замена выражается путем замены аргинина в положении 506 глютамином ( мутация R506Q). Модифицированный таким образом фактор V называется фактором Лейдена, изменение состоит в изменении сайта связывания АРС.

В результате этой мутации фактор V Лейден инактивируется в 10 раз медленнее, чем обычно, и дольше сохраняется в кровообращении, что приводит к увеличению выработки тромбина и, следовательно, к гиперкоагуляции2; 3.

Генетический анализ показал, что эта мутация ответственна за 85-90% случаев устойчивости к АРС4.

Мутация передается аутосомно-доминантно и присутствует примерно у 3-7% населения Кавказа, что является самой распространенной причиной наследственной тромбофилии2.

Эта мутация была подтверждена у пациентов с тромбозом глубоких вен, тромбоэмболиями легочной артерии, окклюзией центральной вены сетчатки, тромбозом синусового мозга и тромбозом печеночных вен. Мутация выявляется у 10-20% пациентов в первом эпизоде ​​венозного тромбоза. Кроме того, 40% пациентов <50 лет с первым эпизодом венозного тромбоза и 60% беременных пациентов с венозным тромбозом являются носителями этой мутации.

Риск тромбоза зависит от гомо- или гетерозиготного статуса этой мутации. Гетерозиготные люди имеют риск тромбоза в 4-8 раз выше, чем люди с нормальным фактором V, в то время как гомозиготы имеют риск в 80-100 раз выше.

Риск возрастает экспоненциально у людей, которые ассоциируются с другими тромботическими факторами риска, такими как: сосуществование других генетических дефектов (дефицит белка C, S, антитромбин III, мутация гена протромбина, мутация в гене, кодирующем метилентетрагидрофолатредуктазу -MTHFR-, и связана с гиперемией) использование оральных контрацептивов, беременность5; 6.

Таким образом, тромбоз глубоких вен и тромбоз мозгового синуса чаще возникают у пациентов, принимающих оральные контрацептивы, беременных или в послеродовом периоде6.

Middendorf и коллеги провели исследование (2004) о роли фактора Лейдена у пациентов с инфарктом миокарда. Результаты исследования показали, что пациенты с лейденской мутацией фактора V имеют предрасположенность к инфаркту миокарда, и традиционные факторы риска развития ишемической болезни сердца будут играть менее важную роль у этих пациентов2.

Что касается осложнений беременности, присутствие фактора V Лейдена, а также мутаций гена протромбина и гена MTHFR связано с повышенным риском повторного прерывания беременности, особенно во втором и третьем триместрах1.

Скрининг бессимптомных конечностей в мутированных семьях широко не рекомендуется из-за низкого риска фатального венозного тромбоза. Тем не менее, исследование может быть полезным в ситуациях, когда беременность или оральные контрацептивы рассматриваются у людей с семейным анамнезом рецидивирующего венозного тромбоза в возрасте <50 лет. Лица, запрашивающие тестирование, и те, кто получает положительный результат, должны быть проинформированы о последствиях диагноза и о признаках или симптомах, требующих неотложного медицинского вмешательства2;

Тест, выполненный в лаборатории Synevo, использует метод ПЦР в реальном времени на приборе LightCycler для обнаружения и генотипирования мутации фактора V Лейдена у пациентов с клиническим подозрением на тромбофилию4.

Собранный образец - венозная кровь4.
Контейнер для сбора урожая - вакуумный контейнер, содержащий ЭДТА в качестве антикоагулянта4.
Собранное количество - столько, сколько позволяет вакуум4.
Причины отторжения образца - использование гепарина в качестве антикоагулянта4.
Стабильность образца - 7 дней при 2-8ºC4.
Метод - ПЦР в реальном времени (LightCycler): цепная реакция полимеризации с обнаружением накопленного продукта ПЦР в режиме реального времени путем измерения испускаемой флуоресценции; в конце циклов амплификации проводится генотипирование путем анализа кривой плавления4.

Интерпретация результатов

Для пациента сообщается об одном из 3 возможных результатов:

- гомозиготный дикий генотип (отрицательный для мутации фактора V Лейдена);
- гетерозиготный генотип (содержит дикий и мутантный аллель для фактора V);
-гомозиготный мутантный генотип (содержит оба мутантных аллеля

Пределы и помехи

На уровне гена фактора V, в дополнение к мутации фактора V Лейдена в положении 1691, возможны еще 3 мутации: 1692, 1689 и 1696. При генотипировании эти редкие мутации приводят к ложноположительному результату (генотип гетерозиготного или гомозиготного мутанта) , Поскольку только повышенная резистентность к активированному белку С связана только с мутацией фактора Лейдена V, всем пациентам с положительным результатом теста на ПЦР необходимо выполнить функциональный (коагуляционный) тест для оценки устойчивости к активированному белку С, если что этот скрининг ранее не проводился4.

Список используемой литературы
1. Энн М. Гроновски. Потеря беременности. В Справочнике клинических лабораторных исследований во время беременности, Humana Press, Totowa, New Jersey, 2004, 341.
2. Донна М. Шоу. Фактор V Лейден: обзор. В Clin Lab Sci 2006; 19 (4): 218.
3. Э. Урлеяну, Ге. Бакальбаша, И. Урлешану. Тромбофилия - акушерские последствия. В Акушерстве № 5/2006.
4. Синевская лаборатория. Конкретные ссылки на рабочую технику 2006 года. Тип ссылки: Каталог.
Лаборатория Корпорации Америки. Каталог услуг и руководство по интерпретации. Фактор V Лейденский мутационный анализ. www.labcorp.com 2003. Тип ссылки: Интернет-связь
5. Ричард Д. Пресс. Клиническое исследование фактора V Лейдена (R506Q) для диагностики и лечения тромбоэмболических нарушений. В Arch Pathol, ноябрь 2002 г.