ДНК Borrelia burgdorferi в клеще

Болезнь Лайма - это мультисистемная болезнь, вызванная укусом клеща, зараженным Borrelia burgdorferi. Изучение антигенных различий между штаммами, выделенными в Америке и Европе, позволило выявить причастность к патологии человека трех генотипов, которые составляют комплекс Borrelia burgdorferi sensu lato: Borrelia burgdorferi sensu stricto (который включает в себя все штаммы, выделенные в Северной Америке), B. garinii и B. afzelii. Все три генотипа циркулируют в Европе, но преобладают B. garinii и B. afzelii1; 2; 3; 6; 7.

Молекулярные методы являются альтернативой в диагностике болезни Лайма и основаны на усилении определенной области бактериального генома. Они применимы ко всем патологическим продуктам, собранным на разных стадиях инфекции, но рекомендуется использовать только у пациентов, которые имеют положительный или сомнительный результат в серологических тестах6.

Рекомендации по определению боррелий - ДНК - диагностика болезни Лайма; 1:
I стадия - биопсия кожи от мигрирующей эритемы;
II стадия - биопсия кожи диссеминированной мигрирующей эритемы или CSF при нейроборелиозе;
III стадия- биопсия кожи при хроническом атрофическом ахромодерматите, синовиальной жидкости при артрите Лайма или CSF при нейроборелиозе.

Техника ПЦР имеет более высокую чувствительность, чем культура, в случае образцов биопсии, крови и суставной жидкости, в отличие от CSF и мочи, где результаты не были удовлетворительными 1; 7.

Исследования, выполненные методом ПЦР-анализа суставной жидкости у пациентов с артритом Лайма, продемонстрировали превосходную чувствительность и специфичность (Nocton, 1994; Dumler, 2001). Напротив, исследования CSF пациентов с острым или хроническим нейроборрелиозом показали минимальное улучшение чувствительности по сравнению с культурой.

В таблице ниже показана чувствительность метода ПЦР - ДНК боррелий в зависимости от исследуемого патологического продукта и стадии инфекции6:

Есть лаборатории, которые используют эту технику для извлечения генетического материала боррелии непосредственно из клеща, вызвавшего укус, с указанием, был ли он инфицирован или нет4.

Подготовка пациента - не требуется4.
Собранный образец - а) биопсия кожи; б) спинномозговая жидкость, собранная при люмбальной пункции; в) синовиальная жидкость; г) кровь; е) моча; е) клещ, извлеченный из места укуса4.
Контейнер для сбора - вакуумный контейнер, содержащий ЭДТА в качестве антикоагулянта для отбора проб венозной крови и стерильный контейнер для других биологических продуктов4.
Собранное количество - а) фрагмент кожи; б) 2 мл; в) 2 мл; г) 3 мл; д) 10 мл4.
Обработка после сбора - образцы не будут центрифугироваться4.
Причины отклонения образца - недостаточное количество; старые, коагулированные, гемолизированные образцы; использование гепарина в качестве антикоагулянта4.
Стабильность образца - образцы крови, продукт поражения, CSF, моча, суставная жидкость стабильны в течение 48 часов при температуре 2-4 ° C до экстракции нуклеиновой кислоты4.
Метод - ПЦР Light-Cycler в режиме реального времени: реакция цепной полимеризации с детекцией накопленного продукта ПЦР в режиме реального времени путем измерения испускаемой флуоресценции (качественный тест) 4.

Справочные значения - Боррелии - ДНК: необнаружимые4.
Предел обнаружения - 276 копий / мл4.

Интерпретация результатов

Положительный результат указывает на присутствие ДНК Borrelia в собранном образце6.

Отрицательный результат не исключает инфекции Borrelia, в то время как положительный результат вне клинического контекста не подтверждает диагноз 3; 6; 7.
ПЦР-тест следует использовать в качестве метода, который расширяет спектр исследований при болезни Лайма и не может заменить другие методы. Полученные результаты будут обязательно соотнесены с серологическими, клиническими и эпидемиологическими данными пациентов.

Список используемой литературы

1. Беттина Вильске, Барбара Дж. Б. Джонсон и Мартин Э. Шрифер. Borrelia In: Patrick R. Murray et al. - «Руководство по клинической микробиологии, 9-е изд. 2007, 62: 971-986.
2. Бетти А. Форбс, Даниэль С. Сам, Алиса С. Вайсфельд. Спирохеты. В диагностической микробиологии, двенадцатое издание, 2007, 48: 533–541.
3. Конемана, Спирохетальные инфекции. В цветном атласе и учебнике диагностической микробиологии, шестое издание, 2006, 20: 1125-1150.
4. Синевская лаборатория. Конкретные ссылки на рабочую технологию, использованную в 2010 году. Тип ссылки: Каталог.
5. Клиника Майо. Медицинские лаборатории Майо. Каталог тестов: болезнь Лайма (Borrelia burgdorferi), молекулярная диагностика, ПЦР. www.mayomedicallaboratories.com. Тип ссылки: Интернет-связь.
6. Фолькер фон Баер, Криста Либенталь, Брита Гайда, Франк-Петер Шмидт, Рудигер фон Баер и Ганс-Дитер Волк. Оценка диагностической значимости теста пролиферации лимфоцитов у пациентов с боррелиозом Лайма. В J Lab Med, 2007; 31 (3).
7. П. Рокко Ла Сала, Майкл Б. Смит. Инфекции спирохет. В «Генерической диагностике и управлении Генри лабораторными методами», двадцать первое издание, 2007, 58, 1059-1074.