Боррелия (Borrelia burgdorferi)- серология

Болезнь Лайма - это мультисистемное инфекционное заболевание, вызываемое спирохетой Borrelia burgdorferi, передающейся человеку от укусов клещей. Это заболевание широко распространено, но имеет более высокую заболеваемость в определенных географических районах и обычно заболевает в летние месяцы.

Изучение антигенных различий между штаммами, выделенными в Америке и Европе, позволило выявить причастность к патологии человека трех генотипов, которые составляют комплекс Borrelia burgdorferi sensu lato: Borrelia burgdorferi sensu stricto (который включает в себя все штаммы, выделенные в Северной Америке), B. garinii и B. afzelii. Все три генотипа циркулируют в Европе, но преобладают B. garinii и B. afzelii2; 3; 5.

Описаны несколько стадий заболевания:

• локализованная ранняя стадия: она проявляется в переменном интервале от инфекции (несколько часов - несколько недель) и характеризуется характерной сыпью (хронической мигрирующей эритемой), сопровождающейся симптомами псевдогриппа и регионарной лимфаденопатией;
• ранняя диссеминированная стадия: возникает от нескольких недель до нескольких месяцев после укуса клеща и включает множественные высыпания, лихорадку, миалгию, сопровождающуюся неврологическими проявлениями (нейроборелиоз), сердечными (расстройства вождения) или ревматологическими (артрит)
• поздняя диссеминированная стадия: возникает в течение нескольких недель или 2 лет после заражения примерно у 60% пациентов, которые не получали должного лечения на ранних стадиях, и включает артрит и неврологические проявления: полиневропатию, астению, расстройства памяти1 ,

Сходство клинических симптомов между болезнью Лайма и несвязанными состояниями создает диагностические проблемы из-за разнообразия и изменчивости клинических симптомов. Диагноз боррелиоза может быть трудно установить на основании клинической картины, особенно при отсутствии укусов клещей и хронической мигрирующей эритемы в анамнезе. Более того, заболевание может оставаться бессимптомным до поздних стадий. Следовательно, обнаружение специфических антител является очень важным инструментом для диагностики заболевания4.

Уровень антител IgM достигает пика через 3-6 недель после начала заболевания, после чего он постепенно снижается, что полезно для выявления недавней инфекции. Антитела типа IgG становятся обнаруживаемыми в различном диапазоне с момента появления антител IgM и, в отличие от них, сохраняются в течение длительного времени5.
Использование в качестве антигена в серологических тестах бактериального лизата из Borrelia burgdorferi может привести к ложноположительным результатам из-за перекрестной реактивности с антителами к другим бактериям со сходной структурой белка, особенно с Treponema pallidum, этиологическим агентом сифилиса. Тесты с использованием бактериального лизата, даже если он происходит от разных штаммов Borrelia burgdorferi, часто могут не дать убедительных результатов на ранних стадиях инфекции.

В нашей лаборатории рекомбинантные антигены (полученные со штаммами E.coli) используются для определения специфических антител к боррелиям, которые повышают точность теста. Таким образом, в случае определения антител IgM антиген представлен белком OspC внешней поверхности, иммуно-доминантным по отношению к ответу IgM на ранней стадии инфекции и который также имеет высокую степень специфичности, а также слитым белком VlsE. В случае антител IgG используется только белок VlsE. VlsE - это белок внешней поверхности, который, как считается, играет главную роль в иммунном ответе на болезнь Лайма; содержит консервативные области (которые функционируют как трансмембранные домены in vivo), вариабельные и неизменные области (экспонированные на внешней поверхности бактериальной мембраны). Во время инфицирования вариабельные области подвергаются процессу последовательного изменения путем рекомбинации.

Антигенная изменчивость поверхностно-экспонированных белков была определена как важный механизм уклонения от иммунитета. Шесть неизменяемых областей (IR 1-6) обнаружены перемежающимися в вариабельном домене и сохраняются у всех штаммов и генотипов комплекса Borrelia burgdorferi sensu lato. У живых бактерий неизменяемые области маскируются вариабельными областями, поэтому они защищены защитными механизмами хозяина. Бактерии обрабатываются антигенпрезентирующими клетками, которые подвергают белок распознаванию иммунной системой. Интересным аспектом является то, что неизменяемые области являются иммунодоминантными при боррелиозе.

Пациенты с болезнью Лайма постоянно производят сильный гуморальный ответ на VlsE на всех стадиях заболевания, поэтому рекомбинантный VlsE является наиболее подходящим маркером для лабораторной диагностики как раннего, так и позднего иммунного ответа4.

Собранный образец - венозная кровь4.
Контейнер для сбора образца - вакуумный без антикоагулянта с / без разделительного геля4.
Обработка, необходимая после сбора образца - отделение сыворотки центрифугированием; определение сделано немедленно; если это невозможно, сыворотка хранится при температуре 2-8ºC4.
Объем образца - минимум 1 мл сер4.
Причины отклонения образца - гемолизированный, липемический или бактериально загрязненный образец4.
Стабильность образца - отделенная сыворотка стабильна в течение 7 дней при 2-8ºC; долгое время при -20 ºC4.
Метод - иммунохимия с хемилюминесцентным детектированием (CLIA) 4.

Референтные значения

Borrelia IgG
<10 AU / мл: отрицательный.
> = 10 и <15 AU / мл: равнозначно; Рекомендуется повторить сбор образца
> = 15 AU / мл: положительный.

Borrelia IgM
<18 AU / мл: отрицательный.
> = 18 и <22 AU / мл: равнозначно; Рекомендуется повторить сбор образца.
> = 22 AU / мл: положительный4.

Пределы и помехи

Лечение антибиотиками на ранних стадиях заболевания часто предотвращает выработку антител.

Наличие ревматоидного фактора и инфекционного мононуклеоза следует исключать у пациентов с изолированным положительным результатом для антител IgM. Фактически, поликлональная стимуляция В-лимфоцитов во время первичной инфекции EBV может привести к неспецифической индукции антител, в том числе против Borrelia burgdorferi4

Список используемой литературы
1. АРУП Лаборатории. Справочник тестов: Антитела Borrelia burgdorferi, Всего, методом ИФА. www.aruplab.com 2010. Тип ссылки: Интернет-связь.
2. Беттина Вильске, Барбара Дж.Б. Джонсон, Мартин Э. Шрифер: Borrelia В руководстве по клинической микробиологии. Патрик Р. Мюррей, Эллен Джо Барон, Джеймс Х. Йоргенсен, Мари Луиза Лэндри, Майкл А. Пфальер, ASM PRESS, США, 9-е изд. 2007; 62: 971-987.
3. Koneman's: Спирохетальные инфекции в цветном атласе и Учебник по диагностической микробиологии, Lippincott Williams & Wilkins, 6 ed 2006; 20: 1125-1151.
4. Синевская лаборатория. Конкретные ссылки на рабочую технологию, использованную в 2010 году. Тип ссылки: Каталог
5. Лаборатория корпорации Америки. Каталог услуг и руководство по интерпретации. Антитела к болезни Лайма. www.labcorp.com 2010. Тип ссылки: Интернет-связь.