Группа крови 0AB (прямой метод Бет-Винсент)

У людей было идентифицировано 26 систем группы крови с 228 антигенами; система группы крови состоит из одного или нескольких антигенов, управляемых одним геном или комплексом из двух или более генов, тесно связанных друг с другом. Также были идентифицированы другие антигены, которые не были отнесены к установленным системам. Антигены эритроцитов могут быть белками, гликопротеинами или гликолипидами. Большинство из них синтезируется эритроцитами, однако некоторые антигены, например, принадлежащие к системе Льюиса, адсорбируются из плазмы на мембране эритроцитов. Некоторые антигены специфичны для эритроцитов, в то время как другие встречаются и на других клетках организма. Знание групп крови имеет решающее значение для трансфузионной терапии. Таким образом, люди, которые не проявляют определенных антигенов эритроцитов, могут продуцировать аллоантикорпы при воздействии крови, содержащей эти антигены, при переливании продуктов крови или во время беременности. Антитела, взаимодействующие с антигенами эритроцитов, вызывают немедленные или отсроченные гемолитические переливающие реакции и гемолитическое заболевание новорожденного 4.

Система группы крови ABO представляет собой наиболее важную систему группы крови, потому что: когда антигены не экспрессируются на поверхности эритроцитов, соответствующие антитела всегда присутствуют в плазме, при этом стимулы для производства антител представлены различными факторами окружающей среды, такими как бактерии (E. coli), который выражает на поверхности структуры, почти идентичные углеводам ABO; сформированные антитела представляют собой смесь IgM (преимущественно) и IgG, активных при 37ºC и способных активировать комплемент, а высокая плотность антигенных сайтов на мембране эритроцитов позволяет связывать большое количество антител, что приводит, в случае переливания несовместимой крови в системе ABO, к точечным гемолитическим трансфузионным реакциям 2;4.

В системе ABO (A, B и O) есть три аллеля; A и B являются кодоминантными аллелями, а O-рецессивным аллелем. Эти три гена определяют четыре фенотипа: A, B, AB и O, при этом люди с фенотипом A или B могут быть гетерозиготными (AO и BO соответственно) или гомозиготными (AA и BB соответственно). Антигены системы ABO расположены на олигосахаридных цепях, которые являются частью гликосфинголипидов. Гены системы ABO напрямую кодируют не антигены, а ферменты, которые добавляют специфические сахара к субстрату в мембране эритроцитов (вещество H): N-ацетил-галактозамин для гена A и галактозу для гена B; аллель o кодирует нефункциональную трансферазу, поэтому к мембране эритроцитов не прикреплен специфический сахар. Ген H кодирует фукозилтрансферазу, которая добавляет L-фукозные группы к терминальной галактозе олигосахаридных цепей, в результате чего образуется вещество H. редкий аллель, иногда наследуемый в локусе H, - это h, который кодирует нефункциональную трансферазу. У гомозигот hh (Бомбейский фенотип) вещество H отсутствует на поверхности эритроцитов, и трансферазы A и B, даже если они присутствуют, не могут добавлять специфические сахара, определяющие антигенную специфичность A или B. клиническая значимость бомбейского феномена заключается в способности этих людей образовывать не только анти-A и анти-B, но и анти-H, что затрудняет поиск крови, совместимой для переливания крови, только кровь от человека с бомбейским фенотипом совместима, и это крайне редко. Мутации в генах A и B приводят к аминокислотным заменам на уровне трансфераз, что приводит к слабой экспрессии антигенов A и B, классифицированных как подгруппы, наиболее распространенные из которых связаны с генами A, A1 и A2. Подгруппы A и B клинически значимы у доноров крови, потому что из-за плохой экспрессии антигена они могут быть фенотипированы как принадлежащие к группе O и, перелитые реципиенту группы O, могут привести к внутрисосудистому гемолизу2;4.

Все иммунокомпетентные люди вырабатывают естественные антитела (изоагглютинины или изогемолизины) к отсутствующим антигенам группы ABO (H). Анти - А и анти-В обычно обнаруживаются через 3-6 месяцев после рождения, а в возрасте 5 лет титр антител достигает своего пика и сохраняется во взрослом возрасте. Титр антител IgM может постепенно уменьшаться с возрастом. Антитела к А и к-B также присутствуют у людей со слабыми вариантами A или B. Новорожденные обычно не имеют значительного количества анти - а и анти-В в плазме, за исключением тех, кто родился от аллоиммунизированных матерей, у которых в кровообращении могут присутствовать антитела IgG от матери, которые пересекли плаценту. Антитела ABO не являются основной причиной гемолитической болезни новорожденного из-за ингибирования антител растворимыми веществами A и/или B, присутствующими в крови, а также антигенами A или B, присутствующими на других клетках за пределами эритроцитов; также сродство связывания антител с молекулами сахаров слабее, чем у антител к белковым молекулам, таким как антиген D4. Гемолиз происходит более вероятно, если мать группа O, с Ребенок группа А2.

Рекомендации по определению группы крови ABO2:

• перед переливанием;
• перед инвазивной или хирургической процедурой, потенциально связанной с геморрагическими осложнениями, которые могут потребовать переливания;
• антигематологический и послеродовой иммуногематологический мониторинг матери и ребенка;
• у доноров крови;
• для совместимости группы ABO при трансплантации почки и сердца.

Подготовка пациента-предварительная подготовка не требуется – полезна информация о некоторых инфузионных методах лечения макромолекулярными растворами, выполненных до определения, переливаниях в течение последних 120 дней, инфекционных заболеваниях с грамотрицательными микробами с сепсисом/без него, злокачественных заболеваниях (карцинома, лимфома, миелома)3.

Собранный образец-а) капиллярная кровь из пульпы пальца; б) венозная кровь 3.

Контейнер для сбора образца-б) вакуум без добавок или активирующий гель (красная или бесцветная крышка); для автоматического метода: 4 мл вакуум, содержащий EDTA (темно-фиолетовая крышка) 3.

Собранное количество-б) сколько позволяет вакуум3.

Причины отторжения образца-сильно гемолизированный образец 3.

Стабильность образца-тест проводится немедленно, если это невозможно, образец хранится 48 часов при 2-8°C;

Методы определения-в лабораториях Synevo проводится:

а. прямой / глобулярный метод (Бет-Винсент) определения группы крови ABO с использованием сывороток анти-a, анти-B и анти-AB со следующими вариантами:

- гемагглютинация по вкусу 3. Используются два контроля: свидетель AB (гемататы пациента с сывороткой AB) и авто-контроль (гемататы и собственная сыворотка)1.

При каждом прогоне образцов используется контрольная группа крови и известный Резус3.

Границы и помехи

Результат определения группы крови должен быть прочитан двумя людьми и, возможно, должен быть подтвержден на втором образце крови1;2.

Ошибки чтения из-за технических ошибок:

- грязная посуда; бактериальное заражение;

- наличие микрохеагов (ложная агглютинация);

- не соблюдается: пропорции гематиса/сыворотки, порядок капания гемотестовых сывороток (противоречивые агглютинации), время чтения – позднее чтение: сухие края (ложная агглютинация), раннее считывание (отсутствие агглютинации или плохая агглютинация).

Ошибки из-за гематиса

Поддельные агглютинации

а) наличие валиков (псевдоагглютинация): применение макромолекулярных растворов (Декстран, ГЭК), нарушения свертываемости крови, неполные свертываемые образцы крови, гиперфибриногенемия, продукты распада фибрина, фибринолитические агенты, диспротеинемия, парапротеинемия, криоглобулинемия, повышение реактивов острой фазы, лекарственные препараты (высокие дозы гепарина, сульфат протамина), ревматоидные факторы, повышение уровня холестерина, билирубин, лейкоцитоз, ферменты лейкоцитар2. Свидетель AB положительный; промывка гематиса позволяет правильно выполнить шаровидный образц1.

б) Самоагглютинация

Наличие холодных агглютининов (авто свидетель положительный). Образец крови и реагенты предварительно нагреваются до 37ºC, и тестирование проводится в горячем2.
Гематии, покрытые аллоантикорпиями: новорожденный от несовместимой беременности (в системе Rh, ABO), пациент переливается несовместимой кровью.
Определение группы крови на крови, собранной из пуповины: желатин Уортона, макромолекулярное вещество, окружающее эритроциты, придает вид псевдоагглютинатов. Для ее удаления необходимо промыть гематис не менее 6 раз перед определением1.
Наличие лекарственных иммунных комплексов.

в) Полиагглютинация

При Септицемиях с грамотрицательными бациллами криптоантигены (Т) подвергаются ферментативному действию бактериальных агентов, распознаваемых антителами (анти-т), присутствующими в большинстве сывороток человека 2. Свидетель AB положительный 1.

Отсутствующие или слабые агглютинации или появление двойной популяции: агглютинация не является полной, с наличием свободных гематий (агглютинаты появляются на розовом фоне)1; 2:

• старая кровь;
• слабые антигены: новорожденные, недоношенные;
• слабые подгруппы A или B;
• ослабление антигенов (при лейкозах, лимфомах, болезни Ходжкина);
• пациент группы А или в переливается кровью группы о, кровоизлияние матери и плода;
• наличие в плазме большого количества вещества А или в (рак желудка, поджелудочной железы), нейтрализующего антитела тест (гематии необходимо промыть для их удаления);
• наличие химеры или мозаики (исключительное, напр.: медуллярный посталотрансплант).