Page 80 - Ghidul Serviciilor Medicale Synevo, Ediția 2, Volum 1

5 METODE DE LUCRU GHIDUL SERVICIILOR MEDICALE
AL LABORATOARELOR SYNEVO

5.1 Metode folosite în hematologie

Determinarea hemoleucogramei
Se realizează pe un analizor automat de hematologie ce permite determinarea a 21 de parametri ai
hemoleucogramei - inclusiv diferenţierea leucocitelor în 5 populaţii - prin următoarele metode:
1) Focusare hidrodinamică (impedanţă electrică);
2) Citometrie în flux cu laser semiconductor;
3) Măsurarea cu SLS (sodium lauril sulfat) a hemoglobinei prin metodă fotometrică.
1) Metoda cu focusare hidrodinamică
Prin această metodă sunt determinate numărul şi dimensiunile eritrocitelor şi trombocitelor. Scopul
focusării hidrodinamice este de a reduce suprapunerea şi recircularea celulelor în zona de detecţie.
După aspirare şi diluare cu reactiv, particulele sunt direcţionate într-un singur rând printr-o apertură şi
generează semnale electrice pulsatorii, pe baza cărora se efectuează numărătorile celulare.
2) Citometria în flux
Numărul de leucocite şi formula leucocitară sunt determinate, după lizarea eritrocitelor, cu ajutorul
citometriei în flux, care permite analizarea caracteristicelor fizice şi chimice ale celulelor. Proba de
sânge este aspirată, diluată şi colorată. Celulele sanguine trec apoi în linie, una câte una, prin centrul
camerei de flux, unde raza laser emisă de semiconductor loveşte celulele sanguine. Ca urmare,
lumina va fi dispersată în direcţii diferite.
Lumina dispersată frontal şi captată de o fotodiodă indică volumul celular, lumina dispersată lateral
furnizează informaţii asupra conţinutului celular (nucleu şi granulaţii), iar lumina fluorescentă laterală
aduce informaţii despre cantitatea de ADN şi ARN celular. Lumina dispersată lateral şi cea fluorescentă
laterală sunt receptate de un tub fotomultiplicator. În final, analizorul va afişa două scatergrame
bidimensionale:
- pe scatergrama 4DIFF (axa x reprezintă intensitatea luminii laterale, iar axa y intensitatea fluorescenţei
laterale) apar cele 5 populaţii leucocitare şi grupul de umbre eritrocitare;
- pe scatergrama WBC/BASO (axa x reprezintă intensitatea luminii laterale, iar axa y intensitatea
luminii frontale) apar populaţia de bazofile şi restul populaţiei de leucocite, precum şi grupul de umbre
eritrocitare.
3) SLS - Hemoglobina
Analizorul determină direct concentraţia hemoglobinei cu ajutorul surfactantului Sodiu-Lauril-Sulfat
(SLS). Reacţia chimică include următoarele etape: hemoliza eritrocitelor, alterarea conformaţiei
moleculei de globină, oxidarea fierului şi formarea SLS-Hb care este măsurată fotometric.
Metoda nu este toxică, iar viteza de conversie a hemoglobinei este mare. Metoda se poate utiliza şi
pentru măsurarea methemoglobinei, deci şi a sângelui de control ce conţine methemoglobină.
Parametrii analizaţi sunt următorii:
a) eritrocitari • numărul de eritrocite
• hemoglobina (Hb)
• hematocritul (Ht)
• indicii eritrocitari: - volumul eritrocitar mediu (VEM)

80