Page 83 - Ghidul Serviciilor Medicale Synevo, Ediția 2, Volum 1

GHIDUL SERVICIILOR MEDICALE 5
AL LABORATOARELOR SYNEVO METODE DE LUCRU

Determinarea reticulocitelor
1.Metoda manuală - numărare microscopică: sângele se amestecă cu un colorant supravital (albastru
cresil briliant/albastru de metilen) în proporţie de 1:1, apoi se prepară frotiuri care se examinează
microscopic cu obiectivul de 100x cu imersie; se numără celulele care conţin un precipitat albastru,
granulo-filamentos sau sub formă de reţea (cel puţin două granulaţii/celulă) din 1000 de eritrocite.
Reticulocitele se calculează procentual după formula:

Nr. Rt
Rt % = x 100
1000 Er

2.Numărarea automată: analizor automat pe principiul citometriei în flux cu fluorescenţă şi LASER
semiconductor.
Parametri analizaţi sunt : • procentul de reticulocite - Ret%
• numărul absolut de reticulocite - Ret#
• pentru un anumite analizoare: fracţia de reticulocite imature (IRF).
Principiul metodei:
Proba de sânge este aspirată, diluată şi colorată; se foloseşte o coloraţie supravitală ce precipită
nucleoproteinele reziduale din eritrocitele imature. În continuare proba ajunge în sistemul optic
de detecţie, unde este analizată prin citometrie în flux cu laser semiconductor. Este efectuată o
scatergramă, axa x reprezentând intensitatea fluorescenţei laterale, iar axa y lumina dispersată frontal
şi sunt proiectate trei grupuri: grupul de eritrocite mature, grupul de reticulocite şi grupul de trombocite,
iar reticulocitele sunt calculate după formulele :
9
Particulele din zona de Rt
Rt % = x 100
Particulele din zona de Er mature + particulele din zona de Rt

Rt % x nr.de Er
Rt # =
100
În cazul analizoarelor care determină suplimentar fracţia reticulocitelor imature, scatergrama este
împărţită pe baza intensităţii luminii fluorescente în 3 zone reticulocitare (cu fluorescenţă scăzută,
medie şi înaltă) şi este calculat procentul de reticulocite din fiecare zonă raportat la numărul total.
În final, se calculează fracţia de reticulocite imature (IRF), reprezentând suma reticulocitelor cu
fluorescenţă medie şi înaltă.

83