Page 120 - Ghidul Serviciilor Medicale Synevo, Ediția 1

Prelucrare necesară după recoltare
Este preferabil ca fixarea frotiurilor să se facă în primele 30 minute de la recoltare. Eventual, se poate face în primele 8
ore. Amestec fixator: alcool etilic 9 părŃi + formol 40% 1 parte. Fixarea se cronometrează 30 secunde, după care
frotiurile se spală cu jet de apă de robinet. Frotiurile fixate se pot colora imediat sau se pot păstra câteva zile la
3
temperatura camerei, până la colorare .
Stabilitate probă
- frotiurile nefixate sunt stabile maxim 8 ore la 18-30ºC;
3
- frotiurile fixate sunt stabile 5 zile la temperatura camerei .
Metodă - examinare microscopică .
3
Interpretarea rezultatelor
Granulele de culoare galben-brună indică prezenŃa activităŃii peroxidazelor celulare.
ReacŃia este intensă în celulele seriei granulocitare. Martorul pozitiv al reacŃiei este reprezentat de granulocitul matur -
granule mari în citoplasmă şi peste nucleu. Este discutabil dacă mieloblastul normal este peroxidazo-pozitiv în
microscopia optică. ReacŃia este pozitivă începând de la stadiul de promielocit; sunt prezente o multitudine de granule
galben-brune în citoplasmă, care uneori maschează alte caracteristici citoplasmatice.
Pentru stabilirea diagnosticului de leucemie acută mieloblastică (LAM) cel puŃin 3% din blaşti trebuie să fie peroxidazo-
pozitivi. Mieloblaştii prezintă de obicei granulele mari, localizate şi mai reduse numeric decât promielocitele normale.
Corpii Auer, rezultaŃi din coalescenŃa anormală a granulaŃiilor azurofile, sunt intens peroxidazo-pozitivi.
Monocitele dau o reacŃie negativă sau slab pozitivă. Monoblaştii din leucemia acută monocitară (LAM-M5) sunt de
obicei negativi, în timp ce monoblaştii din leucemia acută mielomonocitară (LAM-M4) pot fi slab pozitivi.
Limfocitele şi eritrocitele nu au activitate MPO în nici un stadiu de maturare.
În concluzie, reactia pozitivă în blaşti indică leucemie mieloblastică sau mielomonocitară 1;4;5 .
Limite şi interferenŃe
ObŃinerea unei reacŃii pozitive în blaşti are valoare diagnostică pentru leucemia acută mieloblastică, în timp ce reacŃia
negativă este neconcludentă. Rezultatul trebuie coroborat cu alte teste citochimice .
1

7.2.2 ReacŃia acid periodic Schiff (PAS)

InformaŃii generale
În celulele sangvine reacŃia pozitivă este datorată în primul rând prezenŃei de glicogen citoplasmatic. Acumularea de
glicogen se consideră a fi un indicator al dereglării metabolismului acestuia.
Multe din celulele sangvine prezintă o reacŃie PAS pozitivă în citoplasmă. Intensitatea acestei reacŃii şi tipul de colorare
1
variază cu tipul celular .
Principiul reacŃiei
Reactivul Schiff este o soluŃie incoloră obŃinută prin reducerea fucsinei bazice. Acidul periodic oxidează grupul glicol
sau derivaŃii săi. Rezultatul este producerea de aldehide care reacŃionează cu reactivul Schiff pentru a produce o
culoare purpurie .
1;3
Recomandări pentru determinarea PAS
- diagnosticul leucemiei acute limfoblastice (LAL) subtipurile L1 şi L2;
- diagnosticul de sindrom mielodisplazic ori LAM-M6 prin evidenŃierea eritroblaştilor PAS-pozitivi;
1
- diferenŃierea celulelor Gaucher şi a histiocitelor cu granule „albastre ca marea” de alte tipuri de macrofage .
3
Pregătire pacient - à jeun (pe nemâncate) sau postprandial (după mese) .
Specimen recoltat
a) sânge capilar şi/sau aspirat medular - frotiuri
3
b) se recomandă recoltarea simultană de sânge venos pentru hemogramă .
Cauze de respingerea probei
- frotiuri nefixate în maxim 8 ore de la recoltare;
- frotiuri executate din sânge recoltat pe EDTA .
3
Recipient de recoltare
a) se execută frotiuri de sânge capilar direct pe lame de microscopie;
3
b) vacutainer cu EDTA K3 (capac mov), pentru hemogramă .
Cantitate recoltată
a) 3-5 frotiuri;
b) 2 mL .
3