Page 121 - Ghidul Serviciilor Medicale Synevo, Ediția 1

Prelucrare necesară după recoltare
Este preferabil ca fixarea frotiurilor să se facă în primele 30 minute de la recoltare. Eventual, se poate face în primele 8
ore. Amestec fixator: alcool etilic 9 părŃi + formol 40% 1 parte. Fixarea se cronometrează 30 secunde, după care
frotiurile se spală cu jet de apă de robinet. Frotiurile fixate se pot colora imediat sau se pot păstra câteva zile la
3
temperatura camerei, până la colorare .
Stabilitate probă
- frotiurile nefixate sunt stabile maxim 8 ore la 18-30ºC;
3
- frotiurile fixate sunt stabile 5 zile la temperatura camerei .
3
Metodă - examinare microscopică .
Interpretarea rezultatelor
Glicogenul apare colorat în roşu purpuriu, sub formă de granule sau difuz.
Martorul pozitiv al reacŃiei este reprezentat de granulocitul matur.
Granulocitele conŃin glicogen sub formă difuză începând cu stadiul de promielocit unde apare roz şi creşte pe măsura
maturaŃiei. Bazofilele sunt moderat-intens PAS pozitive, frecvent prezentând grămezi amorfe în jurul nucleului. În
leucemia acută mieloblastică (LAM) pot exista mieloblaşti care prezintă granule roşii, mici sau medii. În faza blastică a
leucemiei granulocitare cronice (LGC) blaştii sunt frecvent PAS pozitivi, similar limfoblaştilor din leucemia acută
limfoblastică. Promielocitele din leucemia acută promielocitară (LAM-M3), în special forma hipergranulară, sunt de
obicei PAS pozitive.
În mod normal, un număr mic (mai puŃin de 15%) de limfocite mature pot fi PAS pozitive cu următoarele aspecte :
1+ rare granule roşii, mici sau medii;
2+ număr moderat granule roşii, mici sau medii;
3+ inele de granule roşii, grosolane sau grămezi de material amorf de culoare roşie în citoplasmă sau
acoperind nucleul.
În leucemia limfatică cronică (LLC) netratată şi faza leucemică a limfoamelor, numărul de celule limfoide pozitive este
de obicei crescut în mod semnificativ, dar acest rezultat nu este concludent.
În leucemia acută limfoblastică (LAL) un număr variabil de limfoblaşti pot fi PAS pozitivi 1+,2+,3+. Aspectul PAS pozitiv
3+ prezintă specificitate înaltă pentru limfoblaştii leucemici. Limfoblaştii sunt caracterizaŃi printr-o mare variabilitate a
activităŃii glicogenice: sunt PAS pozitivi doar în ~ 50% din cazurile de LAL-L1 şi L2, în timp ce în LAL-L3 sunt constant
negativi.
Creşterea glicogenului în limfocitele patologice nu este specifică leucemiei, ci se datorează creşterii activităŃii
1
metabolice care are loc în cursul oricărui tip de proliferare limfoidă .
Monocitele sunt negative sau slab pozitive(1+). Precursorii monocitelor în leucemia acută monocitară (LAM-M5) sunt
frecvent pozitivi şi pot prezenta granule mari sau grămezi amorfe, similar limfoblaştilor leucemici, dar de obicei limitate
la citoplasmă. În leucemia acută mielomonocitară (LAM-M4) blaştii, când sunt PAS pozitivi, prezintă un aspect fin
granular.
Precursorii eritroizi normali sunt PAS negativi. Proeritroblaştii şi eritroblaştii bazofili din eritroleucemie (LAM-M6) pot
prezenta un aspect granular, cu granule grosolane dispuse în jurul nucleului. Un aspect difuz PAS pozitiv, poate fi
prezent în eritroblaştii maturi din LAM-M6 şi sindromul mielodisplazic (SMD).
Megacarioblaştii, megacariocitele şi plachetele sunt PAS pozitive. Megacarioblaştii din LAM-M7 prezintă un aspect
difuz sau cu granule dispuse periferic 1;4;5 .
Limite şi interferenŃe
ReacŃia PAS are valoare mică în diferenŃierea LAL de alte tipuri de LA cu diagnostic dificil şi incert, datorită
1
heterogenităŃii limfoblaştilor .

7.2.3 Esteraze nespecifice

InformaŃii generale
Esterazele sunt enzime care hidrolizează esteri alfatici şi aromatici şi sunt utile pentru a distinge celulele seriei
granulocitare de celulele seriei monocitare.
Naphthol AS-D cloracetat esteraza este prezentă în celulele liniei granulocitare şi se găseşte în cantitate mică sau este
absentă în monocite şi precursorii monocitelor.
Esteraza nespecifică este, aşa cum îi arată şi numele, o enzimă ubiquitară prezentă în mai multe tipuri de celule,
printre care: monocite,celule T şi megacariocite. Poate utiliza ca substraturi: alfa-naftil acetat, alfa-naftil butirat, naftol
4
AS- D acetat .