Page 122 - Ghidul Serviciilor Medicale Synevo, Ediția 1

Principiul metodei
Ne vom referi la reacŃia alfa-naftil acetat esterază (ANAE): alfa-naftil acetatul este hidrolizat de esteraze în alfa-naftol,
1;3
care în prezenŃa unei sări de diazoniu formează un compus de culoare roşu-brun, insolubil în apă .
Recomandări pentru determinarea esterazelor nespecifice
1
- diagnosticul LA monocitare tipurile M4 şi M5 .
3
Pregătire pacient - à jeun (pe nemâncate) sau postprandial (după mese) .
Specimen recoltat
a) sânge capilar şi/sau aspirat medular - frotiuri
3
b) se recomandă recoltarea simultană de sânge venos pentru hemogramă .
Cauze de respingerea probei
- frotiuri nefixate în maxim 8 ore de la recoltare;
3
- frotiuri executate din sânge recoltat pe EDTA .
Recipient de recoltare
a) se execută frotiuri de sânge capilar direct pe lame de microscopie;
3
b) vacutainer cu EDTA K3 (capac mov), pentru hemogramă .
Cantitate recoltată
a) 3-5 frotiuri;
3
b) 2 mL .
Prelucrare necesară după recoltare
Este preferabil ca fixarea frotiurilor să se facă în primele 30 minute de la recoltare. Eventual, se poate face în primele 8
ore. Amestec fixator: alcool etilic 9 părŃi + formol 40% 1 parte. Fixarea se cronometrează 30 secunde, după care
frotiurile se spală cu jet de apă de robinet. Frotiurile fixate se pot colora imediat sau se pot păstra câteva zile la
temperatura camerei, până la colorare .
3
Stabilitate probă
- frotiurile nefixate sunt stabile maxim 8 ore la 18-30ºC;
3
- frotiurile fixate sunt stabile 5 zile la temperatura camerei .
3
Metodă - examinare microscopică .
Interpretarea rezultatelor
În monocite, activitatea enzimatică a ANAE se evidenŃiază prin apariŃia unui compus roşu-brun, cu aspect difuz,
moderat sau intens colorat (tip M –monocitar). În celulele T (inclusiv limfoblaştii T) şi megacarioblaşti, aspectul este
mai mult focal, în regiunea Golgi sau paranuclear. Aspectul colorării este util, într-o anumită măsură, în diferenŃierea
tipurilor de celule.
Etapa de inhibare cu NaF a fost adăugată pentru a face esteraza nespecifică „mai specifică”. Activitatea enzimei în
celulele liniei monocitare este inhibată de NaF, în timp ce în restul celulelor activitatea persistă.
Alfa-naftil acetat esteraza este obişnuit negativă în celulele de serie granulocitară. Celulele blastice din LAM-M0, M1 şi
M2 sunt de obicei negative. În LAM–M3 esteraza nespecifică este pozitivă în 20-30% din cazuri, fiind mai slabă ca
intensitate decât în monocite; reacŃia este sensibilă la inhibare cu NaF în aproximativ 1/3-1/2 din cazurile pozitive.
Celulele blastice monocitare din LAM-M4 au activitate ANAE intens pozitivă, difuză (tip M) în proporŃie de peste 20%,
iar în cele din LAM-M5 în proporŃie de peste 80%, sensibilă la NaF.
Megacarioblaştii leucemici din LAM-M7 au pozitivitate focală distinctă parŃial inhibată de NaF. Eritroblaştii din LAM-M6
au de obicei activitate ANAE pozitivă, neinhibată de NaF.
Celulele blastice din LAL sunt negative; foarte rar pot apărea celule ANAE slab pozitive cu aspect granular, cu
1;4
sensibilitate variabilă la NaF .

7.2.4 Fosfataza alcalină leucocitară (indice FAL)

InformaŃii generale şi recomandări
Activitatea fosfatazei alcaline este prezentă în citoplasma neutrofilelor, osteoblastelor, celulelor endoteliului vascular şi
unor limfocite.
Determinarea activităŃii (indicelui) fosfatazei alcaline leucocitare este utilizată in :
- diferenŃierea leucemiei granulocitare cronice de alte boli mieloproliferative (în particular metaplazie mieloidă cu
mielofibroză şi policitemia vera) şi de reactiile leucemoide (infecŃii, neoplazii);
- diferentierea poliglobuliilor secundare de policitemia vera;
- parametru de prognostic în LGC, ce reflectă diferitele faze de activitate ale bolii;