Page 50 - Ghidul Serviciilor Medicale Synevo, Ediția 1
P. 50
acizilor nucleici, ceea ce face posibilă aplicarea tehnologiei la o gamă variată de analiŃi. Emisia de lumină este iniŃiată
electric prin aplicarea unui voltaj complexului imun (care include complexul de Ru) ataşat la microparticule învelite în
streptavidină. Avantajul iniŃierii electrice a reacŃiei chemiluminiscente este că întreaga reacŃie poate fi precis controlată.
Sunt disponibile trei principii ale metodei:
- principiul “sandwich”: iniŃial proba pacientului este mixată cu Ac cuplaŃi cu biotina şi Ac marcaŃi cu Ru
(conjugat); după incubarea amestecului se adaugă microparticulele paramagnetice învelite în streptavidină
(faza solidă); după cea de a doua incubare amestecul de reacŃie este aspirat în celula de măsurat, iar
conjugatul liber este îndepărtat; în continuare se foloseşte curentul electric pentru a excita ruteniul şi a
genera semnalul care va permite detecŃia complexelor Ag-Ac; cantitatea de lumină produsă este direct
proporŃională cu cantitatea de Ag din probă; (vezi fig.5.3.3 care ilustrează etapele de determinare a
tiroglobulinei)
- principiul competitiv: iniŃial sunt mixate specimenul de analizat şi Ag cuplat cu biotina; după prima incubare
se adaugă Ac conjugaŃi cu complexul de Ru şi microparticulele paramagnetice învelite în streptavidină; Ac
conjugaŃi se cuplează cu situsurile încă neocupate ale Ag biotinilat, iar întregul complex se leagă de
microparticule prin interacŃiunea biotinei cu streptavidină; după a doua incubare amestecul de reacŃie este
trecut în celula de măsurare; complexele imune sunt imobilizate magnetic pe suprafaŃa electrodului, iar
componentele nelegate sunt îndepărtate prin spălare; reacŃia chemiluminiscentă este stimulată electric, iar
cantitatea de lumină produsă este invers proporŃională cu concentraŃia de Ag din probă (vezi fig.5.3.4 care
ilustrează etapele de determinare a anticorpilor anti-tiroglobulină);
- principiul “bridging” este similar principiului “sandwich”, dar este destinat detecŃiei de Ac şi include Ag
2;4
biotinilat şi Ag marcat cu Ru .
Fig.5.3.3 Determinarea TG prin ECLIA de tip “sandwich”
Principiul “sandwich’
Principiul “sandwich’
Adăugarea serului si reactivilor Incubarea - I
p
Ser pacient n t
S
e
r
i
c
a
e
i
t
v
c
a
e
c
i
t
e
a
R
R Reactiv A A Reactiv B B
v
Anti-TG
Anti-TG
Complex Anti-TG Biotină Anti-TG Complex
Biotină
Biotină
Complex
ruteniu
ruteniu
TG T G Anti-TG ruteniu
Anti-TG
Anti-TG
Complex
Anti-TG
Anti-TG
ruteniu
n
s
i
(din ser)
( (din ser) e r ) Anti-TG TG TG TG Anti-TG
d
(din ser)
Biotină
Biotină
Anti-TG
Biotină
TG TG Biotină (din ser) TG TG TG Biotină
(din ser) Complex (din ser)
(din ser)
(din ser)
(din ser)
TG T G Anti-TG ruteniu
Complex
Complex
ruteniu
ruteniu
Anti-TG
Anti-TG
Anti-TG
i
n
( (din ser) e r ) Anti-TG Biotină Anti-TG Complex Anti-TG ruteniu Complex Anti-TG
d
s
Biotină
Complex
ruteniu
ruteniu
ruteniu
Anti-TG
ruteniu
Complex
Complex
Anti-TG
Biotinaă
Anti-TG
Anti-TG
Biotinaă
Principiul “sandwich’ După cuplarea complexelor are loc aspirarea amestecului
Principiul “sandwich’
Adăugarea de particule metalice cu streptavidină Incubarea – II spre celula de măsurare
R Reactiv C C
v
c
a
e
t
i
Streptavidină Streptavidină
Anti-TG
Anti-TG
Streptavidină
Streptavidină
TG TG TG Anti-TG Streptavidină Streptavidină Complex
Streptavidină
Biotină
Biotină
Anti-TG
Anti-TG
Anti-TG
(din ser)
(din ser)
(din ser) Biotină TG TG TG TG Anti-TG Anti-TG
Complex
ruteniu
ruteniu
Biotină
Biotină
Biotină
Anti-TG (din ser) Biotină Streptavidină
(din ser)
(din ser)
(din ser)
Anti-TG
Streptavidină
Streptavidină
Anti-TG
Anti-TG
Anti-TG
Anti-TG
Anti-TG
Biotină
Biotină
TG
TG
TG
TG
Anti-TG Anti-TG Anti-TG ruteniu Complex Complex Complex (din ser) Biotină (din ser) Anti-TG
TG
TG
TG
Biotină
Biotină
Biotină
Biotină
(din ser)
(din ser)
(din ser)
(din ser)
(din ser)
Streptavidină
ruteniu
ruteniu
Streptavidină Anti-TG ruteniu ruteniu ruteniu ruteniu Complex
Streptavidină
Anti-TG
Anti-TG
Anti-TG
Complex
Complex
Anti-TG ruteniu Complex Anti-TG ruteniu Complex Streptavidină
Complex
Anti-TG
ruteniu
ruteniu
Complex
Complex
Biotină
Anti-TG
Anti-TG
Anti-TG Biotină
ruteniu
ruteniu
ruteniu
Anti-TG
Complex
Complex
Complex
Anti-TG
Anti-TG
