Page 49 - Ghidul Serviciilor Medicale Synevo, Ediția 1

ELISA de tip “sandwich” ELISA de tip “sandwich”
Fig.1

+ + +

Faza Antigen Conjugat Complexul Substrat Produs final de reacŃie galben
“sandwich”
solidă cu enzimă albastru

Fig.5.3.1

Metoda ELISA de tip competitiv constă în următoarele etape (vezi figura 5.3.2): interiorul microplăcii este învelit cu o
concentraŃie atent titrată de anticorpi; Ag din probă şi Ag marcat cu enzimă din conjugat “concurează” într-o singură
reacŃie pentru numărul limitat de situsuri de pe Ac imobilizaŃi; după îndepărtarea conjugatului se adaugă substratul
1
cromogenic; produsul colorat rezultat în urma reacŃiei este invers proporŃional cu cantitatea de Ag din probă .

ELISA de tip competitiv ELISA de tip competitiv

+
+

Substrat Complex Produs final
albastru anticorp- de reacŃie
Faza Antigen Conjugat Complex anticorp-antigen-enzimă antigen- galben
solidă cu enzima enzimă

Fig.5.3.2

Tehnica ELFA (Enzyme-Linked Fluorescent Assay) asociază metoda ELISA cu o citire finală a rezultatului în
fluorescenŃă albastră. În laboratorul Synevo această tehnică automatizată este folosită pentru determinarea Ac anti-
2
Toxoplasma IgG cantitativ, anti-Citomegalovirus IgM precum şi a avidităŃii anticorpilor anti-Toxoplasma IgG . O
menŃiune specială trebuie făcută în legătură cu testul de aviditate, care este o metodă ce permite diferenŃierea unei
infecŃii recente cu Toxoplasma gondii de o infecŃie mai veche. Termenul “aviditate” sau “afinitate funcŃională” se referă
la o populaŃie de anticorpi şi defineşte forŃa netă de legare a antigenului. Aviditatea anticorpilor IgG este scăzută în
cursul infecŃiei primare, dar creşte treptat în decurs de săptămâni sau luni, ca urmare a selectării celulelor B capabile
să producă imunoglobuline specifice. Demonstrarea prezenŃei anticorpilor IgG cu aviditate crescută indică faptul că
infecŃia a fost dobândită în urmă cu cel puŃin 4 luni, în timp ce obŃinerea unui indice de aviditate scăzută sugerează
3
posibilitatea unei infecŃii recente .

Teste imunochimice cu detecŃie prin electrochemiluminiscenŃă se bazează pe utilizarea unui complex al ruteniu
2+
(II)-tris(bipiridil) [Ru(bpy)3] cu tripropilamina (TPA) care generează lumina electrochimic în legătură cu un ciclu de
reacŃie oxido-reducător: . Ru(bpy)3 are un situs reactiv pentru conjugarea cu analitul; este utilizat un agent activator,
2+
cum ar fi N-hidroxisuccinimid (NHS), deoarece poate fi mai uşor cuplat cu grupuri amino ale proteinelor, haptenelor sau