Page 207 - Ghidul Serviciilor Medicale Synevo, Ediția 1

8.1.28 Electroforeza hemoglobinei

InformaŃii generale
Hemoglobina reprezintă elementul esenŃial pentru principala funcŃie fiziologică a eritrocitului: funcŃia respiratorie.
Hemoglobina este o cromoproteină porfirinică care conŃine fier, în structura sa intrând o parte proteică - globina - şi o
parte prostetică - hemul. Globina diferă ca structură de la o hemoglobină la alta, ea imprimând specificitate diverselor
hemoglobine cunoscute.
În cursul dezvoltarii organismului de la embrion la adult se succedă mai multe tipuri de Hb; hemoglobinele embrionare
Gower 1, Gower 2 şi Portland sunt înlocuite începând cu cea de-a 3-a lună de gestaŃie de către Hb fetală (HbF), care
reprezintă 70-80% din totalul Hb la nou-născut, după care sinteza sa scade rapid, ajungând la sfârşitul primului an de
viaŃa la valori sub 2% din totalul Hb. Hb A şi Hb A2 sunt caracteristice perioadei adulte de dezvoltare; sinteza lor începe
încă din perioada fetală, iar după naştere ele înlocuiesc rapid Hb F. La adultul normal, Hb A reprezintă 97-98%, HbA2
2-3%, iar HbF sub 1% .
1
Hb A este caracterizată în mod obişnuit prin mobilitatea sa electroforetică, prin afinitatea pentru O2 şi prin viteza de
denaturare în mediul acid şi alcalin.
Hb F se caracterizează prin rezistenŃă crescută la denaturarea alcalină, proprietate pe care se bazează şi
determinarea ei chimică, şi prin afinitate crescută la O2 în raport cu Hb A. Valori crescute de Hb F faŃă de normal se
găsesc în diverse situaŃii fiziologice sau patologice: sarcină, anemii severe diverse, anemie Biermer, leucemii,
hipertiroidie, persistenŃă ereditară de Hb F, β- talasemia hetero- şi homozigotă, alte hemoglobinopatii.
Hb A2 poate fi uşor separată electroforetic de Hb A întrucât are o mobilitate electroforetică evident mai lentă decât a Hb
A .
3
Principiul metodei
Într-un câmp electric particulele încărcate cu o anumită sarcină electrică se deplasează în funcŃie de intensitatea
câmpului electric, de încărcarea lor electrică, de mărimea şi forma moleculei. În cazul hemoglobinelor anormale
modificarea structurală duce la modificarea sarcinii electrice, ceea ce permite migrarea şi separarea lor electroforetică.
Electroforeza de Hb folosind ca suport de migrare gelul agar este o metodă rapidă şi sensibilă, permiŃând separarea
2
Hb fiziologice şi patologice, inclusiv a fracŃiilor minore .
Recomandări pentru efectuarea electroforezei de hemoglobină - diagnosticul hemoglobinopatiilor şi sindroamelor
talasemice a căror suspiciune este indicată de:
• anemie hemolitică cronică;
• criză ocluzivă vasculară de cauză necunoscută la un pacient provenit din zone cu niveluri crescute ale Hb S şi/sau
Hb C;
1
• sindrom de hidrops fetal de cauză necunoscută ;
• aspect sugestiv al hemogramei, cu microcitoză şi hipocromie mai severe decât ar fi de aşteptat pentru gradul anemiei
şi număr de eritrocite la limita superioară a normalului sau chiar crescut, asociate cu un număr mare de hematii „în
Ńintă” şi punctaŃii bazofile pe frotiul de sânge. În această situaŃie, pentru diferenŃierea de deficitul de fier, este util
indicele Mentzer:
6
Indicele Mentzer = VEM/nr. de eritrocite (x10 )
>14 sugestiv pentru deficit de fier;
12-14 echivoc
<12 sugestiv pentru tară talasemică .
4
Pregătire pacient - à jeun (pe nemâncate) sau postprandial (după mese) .
2
Specimen recoltat - sânge venos .
2
2
Cauze de respingerea probei - specimen coagulat .
Recipient de recoltare - vacutainer cu K3 EDTA .
2
2
Cantitate recoltată - cât permite vacuumul .
Prelucrare necesară după recoltare - Sângele se centrifugheaza. Eritrocitele se separă şi se spală cu ser fiziologic.
Apoi, ele sunt hemolizate folosind reactivul hemolizant din kit. Hemolizatul se supune electroforezei imediat; eventual,
el poate fi păstrat la 2-8°C. Sângele integral şi eritrocitele spălate, de asemenea, pot fi păstrate la 2-8°C. În nici un caz
vacutainerul cu sânge recoltat pe K3 EDTA nu se introduce în congelator!!! (se produce hemoliză) .
2
Stabilitate probă - sângele integral este stabil 28 zile la 2-8°C ; eritrocitele spălate sunt stabile 28 zile la 2-8°C ;
2
2
hemolizatul este stabil 36 ore la 2-8°C .
2
Metodă - electroforetică urmată de scanarea densitometrică a fracŃiunilor obŃinute .
2
2
Valori de referintă - fracŃie A: >95%; fracŃie A2: 1.5-3.5%; fracŃie F: <2% .