Page 79 - Ghidul Serviciilor Medicale Synevo, Ediția 1

7.1.4 Frotiul de sânge

InformaŃii generale
Examinarea atentă a frotiului de sânge bine efectuat este o parte importantă a evaluării bolilor hematologice. Deşi un
diagnostic specific poate fi sugerat de datele furnizate de hemograma automată, unele boli pot avea un număr normal
de celule, dar morfologie celulară anormală. Frotiul de sânge constituie un mijloc valoros în diagnosticul şi evaluarea
anemiei, anomaliilor eritrocitare ereditare, infecŃiilor, inflamaŃiilor, leucemiilor şi altor boli limfo- şi mieloproliferative etc.
IndicaŃii :
Anumite semnale de avertizare indicate de analizorul automat privind unul/mai mulŃi parametri ai
hemogramei automate: deviere la stânga, limfocite atipice, blaşti, eritroblaşti, schizocite, agregate
trombocitare.
Dacă există indicaŃii clinice/au existat modificări anterioare ale frotiului de sânge.
ObŃinerea în continuare de indicaŃii diagnostice bazate pe morfologia celulelor sanguine.
i. Evaluarea eritrocitelor pe frotiu:
6
Dacă nu se aplică “regula lui 3” [Nr. Er (x10 /µL) x 3 = Hb (g/dL) x 3 = Hct (%)].
Verificarea valorilor indicilor eritrocitari (VEM, HEM, RDW), dacă există dubii că analizorul automat a indicat
valorile corecte; verificarea prezenŃei de dublă populaŃie eritrocitară indicată de histogramă.
Evaluarea morfologiei eritrocitare: anemie normocitară normocromă cu reticulocitoză, anemie macrocitară cu
RDW crescut, anemie microcitară hipocromă medie/severă cu număr crescut de eritrocite.
Eritrocitoză: Hb >18 g/dL la femeie şi >19 g/dL la bărbat.
ii. Evaluarea trombocitelor pe frotiu:
6
Verificarea numărului de trombocite indicat de analizor: trombocite <100x10 /µL sau >1x10 /µL.
3
Evaluarea morfologiei trombocitare (dacă un VTM crescut corespunde prezenŃei de trombocite
gigante/prezenŃei de agregate trombocitare, care ar putea interfera cu numărul de trombocite şi posibil şi cu
numărul de leucocite).
iii. Evaluarea leucocitelor pe frotiu:
Verificarea numărului de leucocite şi formulei leucocitare indicate de analizor: leucocitoză cu neutrofilie cu nr.
de leucocite >13000 la adult, leucocitoză la copii, limfocitoză >5000/µL la adult, limfocitoză la copii,
eozinofilie >1500/µL, monocitoză >1300/µL, bazofilie absolută, neutropenie <1000/µL, pancitopenie.
Efectuarea formulei leucocitare, dacă aceasta nu a fost indicată de analizor.
8
Detectarea de celule anormale .
Pregătire pacient - vezi hemograma completă.
Specimen recoltat şi recipient de recoltă - frotiul de sânge poate fi efectuat din proba de sânge venos recoltată
pentru hemogramă (vacutainer cu K3-EDTA)/sânge capilar neanticoagulat obŃinut direct din deget .
4
4
Cantitate recoltată - o picătură de sânge de mărime medie .
Prelucrare necesară după recoltare (4): frotiul se poate efectua pe lamele (22x22 mm) sau lame de sticlă (frotiul cu
franjuri) care trebuie să fie bine uscate, degresate şi fără praf/scame. Picătura de sânge este întinsă pe suprafaŃa
lamei/lamelei şi este uscată la aer. Frotiurile efectuate pe lamele asigură o distribuŃie uniformă a sângelui pe suprafaŃa
lamelei; pe de altă parte lamele de sticlă sunt mai puŃin fragile, fiind mai uşor de manevrat şi etichetat, dar prezintă o
incidenŃă crescută de acumulare a leucocitelor de dimensiuni mari pe marginile frotiului şi în franjuri.
Un frotiu de calitate acceptabilă trebuie să fie de ~3 cm lungime, 2 cm lăŃime, întins uniform, cu o margine de franjuri
scurtă (<0.3 cm), o arie de citire în mijloc de 1-1.5 cm şi o arie groasă de lungime similară la celălalt capăt.
După uscare frotiurile sunt fixate cu metanol anhidru şi colorate May-Grunwald-Giemsa. Colorantul conŃine albastru de
metilen (convertit la azur metilen cu acid bicromat) şi eozină. Azur metilen este un colorant bazic care colorează în
albastru-violet componentele celulare acide (acizi nucleici, proteine), iar eozina reacŃionează cu elementele celulare
bazice conferind tentă roz-roşiatică componentelor citoplasmatice şi hemoglobinei. În funcŃie de proprietăŃile lor
granulaŃiile leucocitare se colorează diferit permiŃând analiza lor morfologică: granulaŃiile neutrofilelor sunt uşor bazice
şi se colorează slab cu componentul azurofil, granulaŃiile eozinofilelor conŃin un derivat puternic bazic şi se colorează
intens cu eozină, iar granulaŃiile bazofilelor conŃin predominant proteine acide şi se colorează în albastru închis-
violet .
4;5
Stabilitate probă - frotiurile efectuate din tuburile pentru hemogramă trebuie efectuate în primele 2-3 ore de la
1;4
recoltare. Frotiurile fixate în metanol sunt stabile necolorate cel puŃin 1 an fără scăderea calităŃii .
Cauze de respingere a probei - vezi hemograma. Sunt de asemenea neadecvate examinării frotiurile prea groase
/prea subŃiri, frotiurile efectuate pe lame de sticlă care nu au franjuri, frotiurile incorect colorate/cu precipitate de
colorant .
4