Page 208 - Ghidul Serviciilor Medicale Synevo, Ediția 2, Volum 2

11 MARKERI VIRALI GHIDUL SERVICIILOR MEDICALE
AL LABORATOARELOR SYNEVO

Stabilitate probă - serul este stabil 6 zile în condiţii ambientale; 7 zile la 2-8°C; timp îndelungat la
-20°C; evitaţi decongelarea/recongelarea repetată .
1
Metodă – Imunoblot
Testul utilizează antigene recombinate purificate, relevante serologic, care sunt separate pe baza
greutăţii moleculare prin electroforeză în gel de poliacrilamidă în prezenţă de sodium dodecil sulfat
(SDS-PAGE) şi transferate ulterior electroforetic pe o membrană de nitroceluloză (Western blotting).
Situsurile de legare libere de pe membrană sunt saturate cu o soluţie de proteine, după care matricea
este spălată şi tăiată în fâşii (strip-uri). Sunt detectaţi separat anticorpii de tip IgG şi IgM. Selectarea
proteinelor omoloage de la două genotipuri diferite (genotipul 1 şi 3) asigură o sensibilitate înaltă chiar
şi pentru cazurile de infecţie provenite din zonele non-endemice (“autohtone”). Testul detectează cele
4 genotipuri HEV şi poate fi folosit atât pentru screening-ul cât şi pentru confirmarea infecţiei.
Antigenele sunt reprezentate, în ordinea fixării pe strip, de:
- O2N: porţiunea N-terminală a proteinei ORF2;
- O2C: porţiunea C-terminală a proteinei ORF2;
- O2M: porţiunea mijlocie a proteinei ORF2;
- O3: proteina ORF3.
Într-o primă etapă strip-ul încărcat cu antigenele HEV este incubat împreună cu serul diluat al
pacientului. După o etapă de spălare, strip-ul este incubat, în funcţie de clasa de anticorpi testată, cu
un conjugat anti-IgG sau anti-IgM uman marcat cu peroxidază. Conjugatul se va ataşa la complexul
antigen-anticorp format. După îndepărtarea prin spălare a conjugatului nelegat se adaugă soluţia de
colorare – un sistem de detecţie enzimatică colorimetrică care conţine peroxid de hidrogen. Dacă este
prezent conjugatul legat, reacţia enzimatică va genera un produs colorat albastru-închis la nivelul
benzilor ocupate de anticorpii specifici. Astfel, benzile vizualizate sunt rezultatul legării anticorpilor
specifici de antigenele individuale recombinate de la nivelul strip-ului .
1
Valori de referinţă şi interpretarea rezultatelor
Fiecare strip conţine în partea superioară o bandă de control care reprezintă controlul reacţiei necesar
pentru a confirma efectuarea corectă a testului.
Intensitatea benzilor probelor este comparată cu cea a benzii O2C a controlului slab pozitiv inclus
obligatoriu la fiecare rulare. Sunt posibile următoarele exprimări semicantitative:

Intensitate bandă Exprimare rezultat
Absentă -
Intensitate mai mică decât cea a benzii O2C a controlului slab pozitiv +/-
Intensitate comparabilă cu cea a benzii O2C a controlului slab pozitiv +
Intensitate mai mare decât cea benzii O2C a controlului slab pozitiv ++

Interpretarea definitivă a rezultatelor testului se face cu ajutorul unui software (după scanarea strip-
urilor) care în funcţie de intensitate (de la - la ++) acordă un punctaj pentru fiecare bandă a strip-ului
de la 0 la 3.

208