Page 570 - Ghidul Serviciilor Medicale Synevo, Ediția 2, Volum 3

21 TESTE DE MICROBIOLOGIE GHIDUL SERVICIILOR MEDICALE
AL LABORATOARELOR SYNEVO

• examen microscopic direct al produsului recoltat;
• cultură dermatofiţi . 3
Recoltarea probelor
Probele din care se solicită identificarea dermatofiţilor sunt reprezentate de raclate epidermice,
unghiale sau fire de păr. Recoltarea probelor de la nivelul leziunilor se efectuează prin raclarea unei
porţiuni de epidermă sau unghie, cât mai aproape de ţesutul sănătos, cu ajutorul unui bisturiu sau lamă
de microscop; firele de păr afectate sunt prelevate prin smulgere cu o pensetă. Înainte de efectuarea
examenului microscopic şi a culturii probele vor fi introduse în recipiente sterile şi transportate la
laborator; în nici un caz nu vor fi menţinute la frigider .
1;3
Examenul microscopic
Microscopia directă examinează scuamele sau firele de păr în preparat umed montat între lamă şi
lamelă cu soluţie 20% KOH. Se lasă preparatul în repaus aproximativ 30 minute pentru dilacerare.
Pentru clarificarea prelevatelor din unghii se va folosi o soluţie de KOH mai concentrată (25%). Se
examinează iniţial cu obiectivul mic, după care se va folosi obiectivul mare pentru detalii morfologice.
Se urmăresc:
- scuamele pentru prezenţa fragmentelor de hife hialine septate, ramificate şi a
artroconidiilor;
- firele de păr pentru a aprecia invazia ectotrix sau endotrix; mărimea artroconidiilor orientează
diagnosticul 2;3,4 .
Părul infectat cu anumiţi dermatofiţi produce fluorescenţa caracteristică la UV trecută prin filtrul Wood,
această fluorescenţă verde, vie, strălucitoare putand fi vizualizată doar într-o cameră obscură. Trebuie
reamintit însă că numai unii dintre dermatofiţii capabili da a invada părul pot produce fenomenul
fluorescenţei (M. audouini, M. ferrugineum, M. canis). Deasemenea trebuie menţionat că numai
porţiunile pe deplin invadate ale tijei dezvoltă fluorescenţă. În infecţiile recente este posibil ca porţiunea
fluorescentă a părului să nu fi părăsit foliculul pentru a putea fi detectată. Din acest motiv simpla
examinare în fluorescenţă cu eliberarea unui rezultat negativ este incorectă .
4
Izolarea în cultură pură
Pentru însămânţarea materialului patologic pe medii de cultură, perii parazitaţi, scuamele, materialul
unghial sunt mai întâi fragmentate şi apoi inoculate pe suprafaţa mediilor în cel puţin patru puncte şi în
două tuburi pentru a avea suficiente şanse de a obţine o cultură pozitivă. Probele se însămânţează pe
două medii lichide cu rol de îmbogăţire (Sabouraud lichid şi BHI) şi pe două medii solide (Sabouraud
cu Cloramfenicol + Gentamicină şi Mycosel agar).
Incubarea se face la 30°C timp de 30 de zile înainte de a fi considerate negative. Majoritatea fungilor
dermatofiţi cresc după 7-14 zile de incubare.
Culturile pozitive necesită efectuarea de subculturi. Acestea oferă avantajul de a creşte mult mai
rapid, colonia are loc mult mai mult pentru dezvoltare şi permite o apreciere a aspectului macroscopic
avers/revers, necesar identificării finale.
Diagnosticul micologic se face corelând timpul necesar dezvoltării coloniei, aspectul macroscopic al
culturii şi morfologia microscopică a organelor de fructificare .
3,4
Comunicarea rezultatelor

570