Page 59 - Ghidul Serviciilor Medicale Synevo, Ediția 1

9.0

8.0

7.0
6.0
normalizata
5.0
4.0
Fluorescenta
3.0 Titrul maxim
2.0
Titrul minim
1.0

0

-1.0 10 20 30 40 50

Fig.5.6.4 Nr. ciclurilor de amplificare

Deoarece cantitatea de ADN VHB QS este constantă în toate probele, fluorescenŃa emisă de sonda de detecŃie ar
trebui să fie detectată în cursul aceluiaşi ciclu, în cazul tuturor probelor .
1
În treimea inferioară a regiunii de amplificare exponenŃială se stabileşte o valoare prag (“assigned fluorescence level”);
traversarea acestei valori marchează declanşarea amplificării. Pentru fiecare probă se poate determina cu exactitate
ciclul de amplificare în care se înregistrează depăşirea valorii prag (Ct= critical threshold value- vezi fig.5.6.5). Cu cât
valoarea Ct este mai mare, cu atât titrul ADN VHB este mai mic .
1;3

1.0
0.9
0.8
Nivelul prag de Ct = 27.1
0.7 fluorescenta

0.6
normalizata 0.5
0.4
0.3
Fluorescenta 0.2

0.1
0
-0.1
-0.2 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29

Nr. ciclurilor de amplificare
Fig. 5.6.5

Constantele de calibrare specifice lotului de reactivi vor fi folosite împreună cu Ct corespunzătoare ADN VHB şi ADN
VHB QS pentru calcularea titrului ADN VHB din probe şi controale .
1

În cazul determinării ARN viral hepatită C, procesul se desfăşoară într-un mod similar, dar se adaugă şi etapa de
transcriere inversă a ARN-ului Ńintă pentru a genera ADN-ul complementar (ADNc). Această etapă este realizată tot de
ADN polimerază, ceea ce permite ca atât transcrierea inversă cât şi amplificarea PCR să se producă împreună cu
1
detecŃia în timp real a ampliconului .