Page 61 - Ghidul Serviciilor Medicale Synevo, Ediția 1

DetecŃia tipurilor oncogene HPV
Testul include 4 procese majore:
- pregătirea probei;
- amplificarea ADN-ului Ńintă cu ajutorul unor primeri complementari specifici HPV;
- hibridizarea produşilor de amplificare la sonde oligonucleotidice specifice Ńintei;
- detecŃia acestora printr-o metodă colorimetrică.
Etapa de pregătire a probei constă în extracŃia ADN HPV din celule cervicale recoltate în mediu lichid, printr-o tehnică
manuală.
Amplificarea se realizează într-un termocycler, iar detecŃia pe un analizor ELISA automat.
Pentru monitorizarea acurateŃii acestor 4 procese, se foloseşte un control celular reprezentat de ADN-ul β-globinei
umane care se va amplifica simultan cu ADN-ul Ńintă.
Amestecul de reacŃie conŃine perechi de primeri specifici atât pentru ADN-ul provenit de la 13 tipuri HPV cu risc înalt,
cât şi pentru ADN-ul β-globinei. DetecŃia ampliconului este efectuată cu ajutorul unor sonde oligonucleotidice specifice
care permit identificarea separată a ampliconului HPV şi a celui corespunzător β-globinei.
Un rezultat negativ pentru o probă este validat numai dacă se obŃine un rezultat pozitiv pentru ADN-ul β-globinei.

Bibliografie

1. Laborator Synevo. ReferinŃe specifice tehnologiei de lucru utilizate. 2006. Ref Type: Catalog
2. M. Tevfik. Real-Time PCR. Ref Type: Internet communication.
3. RT-PCR in timp real. www.cantacuzino.ro