Page 102 - Ghidul Serviciilor Medicale Synevo, Ediția 2, Volum 1

5 METODE DE LUCRU GHIDUL SERVICIILOR MEDICALE
AL LABORATOARELOR SYNEVO

celulară şi să crească astfel numărul celulelor în metafază.
Virtual, orice probă care conţine celule nucleate viabile poate fi supusă analizei citogenetice. Cu toate
acestea, anumite tipuri de celule sunt mai uşor de obţinut şi cultivat, fiind astfel preferate pentru
testare.
Tipuri de probe pentru examenul citogenetic:
● sânge periferic recoltat pe heparină: pentru studiile citogenetice de rutină ale adulţilor şi copiilor;
● măduva osoasă: în cazul neoplaziilor hematologice;
● cultură de fibroblaşti din biopsiile cutanate;
● ţesuturi: recoltate imediat după deces în momentul autopsiei sau pentru efectuarea cariotipului din
produsul de concepţie rezultat în urma unui avort spontan sau provocat;
● lichid amniotic recoltat prin amniocenteză: pentru diagnosticul prenatal (săptămânile 16-18 de
sarcină);
● vilozităţi coriale: pentru diagnosticul prenatal (săptămânile 10-14 de sarcină);
● sânge din cordonul ombilical: pentru cariotipare rapidă la o vârstă gestaţională ≥ 20 săptămâni.
Toate probele trebuie recoltate şi transportate în condiţii sterile; prezenţa bacteriilor sau fungilor va
compromite sever analiza, celulele procariote prezentând un avantaj de creştere faţă de cele umane.
Pentru ca numărul celulelor viabile să fie cât mai mare, probele trebuie transportate cât mai repede
către laborator; probele de sânge, măduvă osoasă, lichid amniotic şi vilozităţi coriale vor fi menţinute
la temperatura camerei, în timp ce ţesuturile solide vor fi transportate într-o baie de gheaţă. Probele
de vilozităţi coriale vor fi introduse într-un tub de tip Falcon ce conţine un mediu de cultură suplimentat
cu antibiotice.
Imediat după sosirea probelor în laborator acestea vor fi cultivate in vitro; în funcţie de tipul celular se
poate folosi o tehnică de cultură în suspensie sau în monostrat (prin fixare la o suprafaţă):
- celulele din sânge şi măduva osoasă cresc în suspensie, de aceea aceste probe vor fi introduse
direct în mediul de cultură; măduva osoasă este în mod caracteristic cultivată 24-48 ore, în timp ce
limfocitele necesită 3-4 zile de cultivare;
- celulele din lichidul amniotic, vilozităţile coriale şi fragmentele de ţesuturi solide sunt cultivate sub
formă de monostrat in situ; ţesuturile şi vilozităţile coriale sunt mai întâi dezagregate printr-o tratare
uşoară cu colagenază, după care celulele individuale sunt “însămânţate” pe o lamelă de sticlă şi
acoperite cu mediu de cultură; în cazul lichidului amniotic, celulele vor fi separate prin centrifugare
înainte de a fi însămânţate pe plăci pentru a forma colonii in situ; timpul de cultivare este de 5-10 zile
pentru lichidul amniotic şi vilozităţile coriale şi de maximum 2 săptămâni pentru ţesuturile solide.
După obţinerea unei creşteri maximale toate tipurile de celule sunt recoltate prin tehnici similare .
2
Vom detaila în continuare etapele analizei cromozomiale din sânge:
1. cultivarea limfocitelor;
2. recoltarea cromozomilor în metafază;
3. prepararea cromozomilor;
4. colorarea cromozomilor;
5. examinarea microscopică (asistată de computer).
1. Din sângele recoltat într-un recipient cu heparină se face o cultură de celule prin imersia
într-un mediu de cultură complet îmbogăţit cu ser de viţel şi antibiotice; este necesară o

102