Page 107 - Ghidul Serviciilor Medicale Synevo, Ediția 2, Volum 1

GHIDUL SERVICIILOR MEDICALE 5
AL LABORATOARELOR SYNEVO METODE DE LUCRU

intensitatea semnalului generat este redusă; o sensibilitate mai mare este obţinută prin folosirea unor
sisteme mai complexe de detecţie care asigură amplificarea semnalului (de exemplu marcarea sondei
cu biotină, legarea spontană a moleculelor fluorescente de streptavidină de hibridul in situ biotinilat,
urmată de detecţia efectuată cu ajutorul anticorpilor anti-avidină conjugaţi cu fluoresceină). Datorită
acestor optimizări este posibil să se detecteze secvenţe aflate într-o singură copie pe cromozom cu
sonde mai scurte de 0.8 kb.
În aplicaţiile clinice ale tehnicii FISH scopul principal este de a stabili dacă o genă, o mutaţie
specifică sau o rearanjare cromozomială sunt prezente, de aceea este esenţial ca sondele să fie bine
caracterizate şi specifice locusului în cauză .
1;2
Tipuri de sonde ADN (Biblioteci ADN)
- biblioteci de fagi şi ADN plasmidic în care sunt clonaţi cromozomii umani;
- biblioteci de ADN plasmidic cu zone specifice din cromozomii umani;
- cosmide (plasmide cu secvenţe ale fagului Lambda al E. coli)
- YACs (Yeast artificial chromosomes) sunt cromozomi sintetici ce conţin secvenţe ADN bine definite
necesare replicării şi conservării în celule levurice; constituie vectori de clonare a unor fragmente
ADN mari (între 100 şi 3000 kb).
Tehnica FISH este aplicată în laboratorul nostru în diagnosticul prenatal al aneuploidiilor, cum ar fi
trisomia 21 (vezi figura 5.5.4) .
1

TRISOMIA 21 detectată prin cariotipare úi
tehnică FISH (3 semnale portocalii)

Fig. 5.5.4 Adaptare după Genetics – Prenatal Diagnostics www.ivfclinicindia.com

Bibliografie

1. Buselmaier W. Chromosomes des Menschen. In Biologie fuer Mediziner, 2007, 89-115.
2. Constance K. Stein. Applications of Cytogenetics in Modern Pathology. In Henry’s Clinical
Diagnosis and Management by Laboratory Methods- Sauders Elsevier 21-Ed 2007, 1260-1281.
3. Eberhard Passarge. Chromosomes. In Color Atlas of Genetics, Georg Thieme Verlag KG, 3rd
Edition, 2007, 190-195.

107