Page 110 - Ghidul Serviciilor Medicale Synevo, Ediția 2, Volum 1

5 METODE DE LUCRU GHIDUL SERVICIILOR MEDICALE
AL LABORATOARELOR SYNEVO

- acurateţe mai mare a rezultatelor obţinute (efectuarea detecţiei se realizează în faza precoce a
reacţiei, respectiv în faza de creştere exponenţială a amplificării, când se produce o dublare exactă a
cantităţii de amplicon la fiecare ciclu; detecţia în acest moment este optimă în sensul că rezultatele se
corelează mai bine cu nivelul iniţial al ţintei, comparativ cu tehnica PCR convenţională, în care detecţia
are loc în faza de platou, după ce reacţia a fost stopată, iar produşii au început să se degradeze - vezi
fig.5.6.1.2);
- domeniu de linearitate mult extins (sunt necesare mai puţine diluţii ale probelor);
- limita inferioară de detecţie mult îmbunătăţită (se pot detecta cantităţi mai mici ale ADN-ului ţintă,
avantaj esenţial, spre exemplu, în evaluarea răspunsului virusologic susţinut la pacienţii cu hepatită
cronică cu virus C) .
4;5

Aria de detecĠie pt PCR convenĠional

Aria de Platou
detecĠie pt
Real-Time
PCR
ExponenĠială Liniară

ADN

Nr. de cicluri
Fig. 5.6.1.2

În laboratorul Synevo cele 2 tipuri de metode PCR se aplică la efectuarea următoarelor teste:
• Real-time PCR: determinarea încărcăturii virale la pacienţii infectaţi cu virusurile
hepatitice B sau C, virusul imunodeficienţei umane 1 (HIV-1), virusurile herpetice,
enterovirusuri, parvovirus B19, polyomavirusuri, Mycobacterium tuberculosis complex,
Borrelia burgdorferi, Chlamydia pneumoniae; analiza mutaţiei factorului V (FV Leiden)
şi a mutaţei protrombinei;
• PCR convenţional cu următoarele tipuri de detecţie a produsului PCR:
- colorimetrică (după hibridizarea cu sonde specifice legate de o fază solidă):
▪ în microplacă (determinarea ADN-ului pentru Chlamydia trachomatis şi Neisseria
gonorrhoeae în probe urogenitale);
▪ pe stripuri de nitroceluloză sau de nylon (revers-hibridizare dot/blot pentru
genotiparea HPV; genotiparea HCV) .
4

110