Page 132 - Ghidul Serviciilor Medicale Synevo, Ediția 2, Volum 1

5 METODE DE LUCRU GHIDUL SERVICIILOR MEDICALE
AL LABORATOARELOR SYNEVO

sau a dispersiei - SS,FS; axa y - ordonata indică numărul celulelor cu aceeaşi intensitate) sau a
diagramelor dot plots (biparametrice: SS/FS), în care fiecare celulă este reprezentată printr-un punct
(dot), şi care pot fi: dot plots, density plots (reprezentare tridimensională, al treilea parametru fiind
numărul de evenimente), contour plots (cu linii contur desenate pentru a forma coordonate x şi y
ce prezintă număr similar de celule). Diagramele de tip dot-plot sunt adesea împărţite în 4 cadrane;
astfel, celulele sunt divizate în 2 populaţii dublu negativă, respectiv dublu pozitivă şi în 2 populaţii
pozitive pentru unul din cei doi parametri. În practica clinică este recomandată prezentarea simultană
a doi parametri, această metodă facilitând caracterizarea a 4 fenotipuri diferite (ex. CD4+/CD8-, CD4-/
CD8+, CD4-/CD8-, CD4+/CD8+) .
1;2
O metodă mult mai larg folosită de prezentare a datelor este cea de tip LIST-MODE. Această metodă
permite păstrarea diferiţilor parametri sub forma unei liste, iar datele pot fi reanalizate ulterior şi
prezentate ca histograme. Este posibilă astfel reprocesarea datelor, care este utilă mai ales în cazul
probelor ce conţin populaţii celulare heterogene .
5

Figura 5.7. 2: Diagrame dot plot (www.bio.umass.edu.)
Un aspect important al citometriei în flux este selecţia doar a unui tip de populaţie celulară în vederea
analizei. Aceasta poartă denumirea de GATING şi este realizată electronic. Practic, programul
permite selecţia celulelor care urmează a fi analizate, în intervalul delimitat de anumiţi parametri. Prin
stabilirea porţilor – “gating” - ce grupează celulele în funcţie de parametri specifici (nefluorescenţi - FS,
SS; conjugatele anticorp monoclonal - fluorocrom specific), durata aplicaţiei scade considerabil şi este
mult mai precisă.
“Gating”-ul iniţial pentru focusarea unei populaţii leucocitare specifice implică în mod tipic utilizarea
celor 2 parametri nefluorescenţi, FS şi SS, cu obţinerea a 3 populaţii, limfocite normale, monocite
şi granulocite (în absenţa eritrocitelor şi plachetelor contaminante). În majoritatea circumstanţelor
această metodă este eficientă în distingerea unei populaţii limfocitare relative pure. Totuşi prezenţa

132