Page 129 - Ghidul Serviciilor Medicale Synevo, Ediția 2, Volum 1

GHIDUL SERVICIILOR MEDICALE 5
AL LABORATOARELOR SYNEVO METODE DE LUCRU

5.7 Metoda citometriei în flux
aplicată la testele de imunofenotipare limfocitară

Citometria în flux (engl. flow cytometry) reprezintă o metodă de măsurare a proprietăţilor celulare
(citometrie) pe măsură ce celulele se deplasează într-un singur fir (flux) într-o coloană de lichid şi
întrerup o rază de lumină laser . Aceasta a devenit o metodă standard de laborator în ceea ce priveşte
4
evaluarea celulelor hematopoietice, incluzând în special identificarea populaţiilor şi subpopulaţiilor
limfocitare, metoda fiind cunoscută şi ca imunofenotipare.
În medicina clinică citometria în flux a fost urgentată de necesitatea determinării numărului absolut
de limfocite T-CD4 pozitive, util în stadializarea şi în monitorizarea tratamentului la pacienţii infectaţi
cu HIV. Ulterior această metodă de diagnostic de laborator şi-a găsit aplicaţie în evaluarea bolilor
limfoproliferative, în studiul sindroamelor de imunodeficienţă şi a altor boli mediate imun .
1
Necesitatea analizării multiparametrice a fost îndeplinită de introducerea fluorocromilor pentru
măsurarea conţinutului total de ADN în detectarea celulelor canceroase şi a anticorpilor marcaţi
fluorescent specifici pentru markerii celulari de suprafaţă pentru separarea subpopulaţiilor celulare .
4
Utilizarea de sonde fluorescente multiple oferă informaţii privind coexpresia de ţinte multiple ca
şi densitatea relativă a fiecărei ţinte, aceste ţinte putând fi proteine exprimate pe suprafaţa sau în
interiorul celulei, permiţând analizarea unor modificări legate de activarea celulară şi apoptoză,
evaluarea statusului ciclului celular .
1;2
Există citometre în flux care sunt de asemenea “sortatoare celulare”, capabile să depoziteze selectiv
celule dintr-o anumită populaţie în tuburi, aceste celule putând fi analizate în continuare sau folosite
pentru experimente sau culturi .
2
Componentele de bază ale citometrului în flux sunt: sistemul fluidic, sistemul optic şi sistemul
electronic.

Sursă de Camera Sistem
lumină de flux optic

Sistem
Computer de
detecĠie

Figura 5.7.1: Citometrul în flux

Sistemul fluidic are rolul de a prezenta celulele una câte una (focalizare hidrodinamică) la punctul de
întâlnire cu fasciculul de excitaţie (fasciculul laser).

129