Page 128 - Ghidul Serviciilor Medicale Synevo, Ediția 2, Volum 1

5 METODE DE LUCRU GHIDUL SERVICIILOR MEDICALE
AL LABORATOARELOR SYNEVO

Denaturarea termică úi hibridizarea
primer-ului unic

Câteva
cicluri
Sinteza ADN în prezenĠa celor patru
deoxinucleotide, unei dideoxinucleotide
úi a ADN polimerazei termostabile

Fig. 5.6.2.3 Secvenţierea ciclică
(Adaptare după Tom Strachan, Andrew P. Read. PCR, DNA Sequencing and In Vitro Mutagenesis.
In NCBI Human Molecular Genetics. www.nlm.nih.gov).

Prin secvenţierea ADN-ului se depistează mutaţii punctiforme, deleţii şi inserţii mici; se poate secvenţia
o genă întreagă (dacă sunt cunoscute mai multe mutaţii) sau exoni specifici (dacă anumite mutaţii se
produc frecvent). Uneori testarea se face în 2 etape: secvenţierea anumitor exoni pentru depistarea
mutaţiilor celor mai frecvente, urmată de secvenţierea tuturor exonilor atunci când prima etapa dă
rezultate negative.
În laboratoarele noastre această tehnică se aplică în diagnosticul bolilor genetice (hemofilii, boala
vonWillebrand, talasemii, galactozemie, fibroză chistică, boala Gaucher, sindroame adrenogenitale
etc), depistarea mutaţiilor KRAS în tumori colonice, a mutaţiilor genelor BRCA1, BRCA2 (asociate
cu cancerul ereditar de sân/ovar), MLH1 şi MSH2 (asociate cu cancerul colorectal non-polipozic
ereditar), APC (polipoza adenomatoasă familială), MEN1 (neoplazia endocrină multiplă tip 1), MEN2
(neoplazia endocrină multiplă tip 2) etc . 2

Bibliografie

1. Eberhard Passarge. Molecular Basis of Genetics. In Color Atlas of Genetics, Georg Thieme
Verlag KG, 3rd Edition, 2007, 62-64.
2. Laborator Synevo. Referinţe specifice tehnologiei de lucru utilizate. 2010. Ref Type: Catalog.
3. Tom Strachan, Andrew P. Read. PCR, DNA Sequencing and In Vitro Mutagenesis. In NCBI
Human Molecular Genetics. www.nlm.nih.gov.

128