Page 353 - Ghidul Serviciilor Medicale Synevo, Ediția 2, Volum 3

GHIDUL SERVICIILOR MEDICALE 18
AL LABORATOARELOR SYNEVO TESTE DE BIOLOGIE MOLECULARĂ

1a şi 1b sunt incluse secvenţe adiţionale ale genei core .
5
Pregătire pacient - nu este necesară o pregatire specială .
5
Specimen recoltat - sânge venos . 5
Recipient de recoltare - vacutainer ce conţine EDTA ca anticoagulant .
5
Cantitate recoltată - cât permite vacuumul .
5
Cauze de respingere a probei - folosirea heparinei ca anticoagulant; probe coagulate sau
hemolizate .
5
Stabilitate probă – sângele EDTA este stabil 48h la 2-8ºC .
5
Metodă - reacţie de polimerizare în lanţ urmată de revers-hibridizare; produsul de amplificare biotinilat
suferă un proces de hibridizare folosindu-se sonde oligonucleotidice specifice pentru regiunile 5’UTR
şi core ale diverselor genotipuri HCV fixate pe un strip de nitroceluloză; după etapa de hibridizare se
adaugă conjugatul (streptavidină marcată cu fosfatază alcalină) care se va ataşa de hibridul biotinilat;
substratul cromogen adăugat în final va reacţiona cu complexul strepatvidină-fosfatază alcalină şi va
genera un precipitat violet maroniu care va fi vizualizat sub forma unor benzi pe strip; interpretarea
rezultatelor se face cu ajutorului unui card .
5
Limite şi interferenţe
Efectuarea genotipării HCV nu este recomandată pentru screening-ul sau confirmarea infecţiei HCV.
Testul este posibil numai în cazul existenţei unei viremii C > 600 UI/mL.
În anumite cazuri se pot obţine rezultate neinterpretabile datorită heterogenităţii secvenţelor genomului
HCV, infecţiior mixte sau existenţei (rare) de tulpini HCV recombinate .
5

Bibliografie

1. AASLD Practice guidelines http:/www.aasld.org/pdffiles/Prac._Guide_Hep_C
2. Consensus Conference Treatment of hepatitis C. Maison de la Chimie, Paris, France, 27 – 28
february 2002. Agence Nationale d”Accreditation et d”Evaluation en Sante (ANAES).
3. Chen Z, Weck KE. Hepatitis C virus genotyping: interrogation of the 5’ untranslated region
cannot accurately distinguish genotypes 1a and 1b. In J Clin Microbiol. 2002; 40: 3127 – 3134.
4. Ileana Constantinescu, Institutul Clinic Fundeni. Genotiparea virusurilor hepatitice în România.
Simpozion iunie 2008, Tg. Mureş: Rolul tehnicilor de biologie moleculară în elucidarea
mecanismelor infecţiei cu virusul hepatitic de tip C, precum şi în descoperirea de noi markeri
pentru fibroză şi carcinomul hepatocelular asociate cu această infecţie.
5. Laborator Synevo. Referinţele specifice tehnologiei de lucru utilizate. 2010. Ref Type: Catalog.
6. Neaga Emil. Prevalenţa genotipului 1 HCV în România. Simpozion iunie 2008, Tg. Mureş: Rolul
tehnicilor de biologie moleculară în elucidarea mecanismelor infecţiei cu virusul hepatitic de tip
C, precum şi în descoperirea de noi markeri pentru fibroză şi carcinomul hepatocelular asociate
cu acastă infecţie.
7. Nguyen MH, Keeffe EB. Prevalence and treatment of hepatitis C virus genotypes 4,5 and 6. In
Clin Gastroenterol Hepatol. 2005; 10: S97 – S101.
8. Pawlotsky JM. Hepatitis C virus genetic variability: pathogenic and clinical implications. In Clin

353