Page 117 - Ghidul Serviciilor Medicale Synevo, Ediția 2, Volum 1

GHIDUL SERVICIILOR MEDICALE 5
AL LABORATOARELOR SYNEVO METODE DE LUCRU

Tehnica Dynal SSP pentru tipajul HLA
Dynal SSP este o tehnică PCR ce utilizează primeri cu secvenţă specifică pentru tipajul HLA. Produsul
Dynal SSP constă în amestecuri de primeri, fiecare conţinând una sau mai multe perechi de primeri
specifici, precum şi o pereche de primeri de control (specifici pentru o secvenţă nonalelică din probă,
care funcţionează ca un control intern al PCR, verificând eficienţa procesului). Dynal SSP este bazat
pe principiul că un set de primeri cu o complementaritate perfectă cu proba poate fi utilizat mult
mai eficient decât seturile de primeri cu una sau mai multe nucleotide necomplementare la capătul
3’. Specificitatea sistemului de tipizare este parte a procesului de amplificare, iar procesarea post-
amplificare este redusă la minimum. În cazul în care are loc amplificarea, identificarea alelelor ţintă se
face prin electroforeză în gel de agaroză (vezi fig. 5.6.1.8).
Interpretarea rezultatelor obţinute poate fi efectuată rapid cu ajutorul unui program de interpretare –
Dynal SSP Tool, care furnizează o a doua opinie după interpretarea manuală, reducând astfel riscul
unor erori umane .
4

ExtracĠie ADN

Amplificare ADN cu primeri DYNAL SSP

Complementaritate Necomplementaritate

Amplificare Lipsa amplificării

DetecĠie

Produs
specific
Control Control
pozitiv pozitiv

Interpretare cu
SSP Tool ™
Fig. 5.6.1.8 Principiul amplificării ADN cu Dynal SSP
(Adaptare după www.invitrogen.com)

Analiza polimorfismelor B/b şi Fok1 de la nivelul genei receptorului vitaminei D (VDR)
Deşi mai mult de 99% din genomul uman este identic la toate persoanele, există încă milioane de
regiuni ale ADN-ului care prezintă variaţii interindividuale (polimorfisme). În timp ce majoritatea acestor
polimorfisme nu este asociată cu disfuncţionalităţi recunoscute, modificările la nivelul promotorului

117