Page 119 - Ghidul Serviciilor Medicale Synevo, Ediția 2, Volum 1

GHIDUL SERVICIILOR MEDICALE 5
AL LABORATOARELOR SYNEVO METODE DE LUCRU

unei a doua runde de amplificare cu cel de-al doilea set de primeri care hibridizează la o secvenţă
situată în interiorul secvenţei amplificată de primul set de primeri (vezi fig. 5.6.1.10). Sensibilitatea
crescută rezultă din numărul total de cicluri mai mare, iar specificitatea din hibridizarea celui de-al
doilea set de primeri la secvenţe care se găsesc doar în produşii primei runde PCR. Dezavantajul
major constă în riscul mare de contaminare ce poate avea loc în cursul transferului produşilor rezultaţi
din prima rundă în cel de-al doliea tub de amplificare. Acest fapt poate fi evitat prin stabilirea unor
protocoale de amplificare într-un singur tub .
2
În laboratorul nostru tehnica nested-PCR se aplică în cursul etapelor de detecţie calitativă a produşilor
de transcripţie ARNm BCR-ABL1 . 4

Primul set Primul set de
de primeri ADN Ġintă primeri
(externi) (externi)

Primul
amplicon
Al doilea set de Al doilea set de
primeri (interni) primeri (interni)

Amplificarea specifică a ADN-ului Ġintă

Fig. 5.6.1.10 Principiul nested-PCR (Adaptare după fig. www.ivpreseacrh.org/nested_pcr.htm)

◦ Multiplex-PCR
Două sau mai multe seturi de primeri, destinate amplificării unor ţinte diferite, sunt incluse în acelaşi
amestec de reacţie. Prin această tehnică pot fi co-amplificate într-un singur tub mai multe secvenţe
dintr-o probă. Primerii utilizaţi în reacţiile multiplex trebuie să fie atent selectaţi pentru a avea
temperaturi de hibridizare similare şi a nu fi complementari unii faţă de ceilalţi (ca să se evite formarea
dimerilor de primeri şi ineficienţa reacţiei) .
2
În laboratorul Synevo tehnica multiplex-PCR este aplicată la detectarea microdeleţiilor cromozomului
Y, în cursul etapelor de detecţie calitativă a produşilor de transcripţie ARNm BCR-ABL1, în cadrul

119