Page 121 - Ghidul Serviciilor Medicale Synevo, Ediția 2, Volum 1

GHIDUL SERVICIILOR MEDICALE 5
AL LABORATOARELOR SYNEVO METODE DE LUCRU

1. Denaturare úi hibridizare
SecvenĠă primer PCR Y
SecvenĠă primer PCR X
SecvenĠă de umplere
SecvenĠă de hibridizare (stângă) SecvenĠă de hibridizare (dreaptă)

2. Ligare

3. PCR cu primerii universali X úi Y
Amplificare exponenĠială doar a probelor ligate

4. Analiza fragmentului

Fig. 5.6.1.11 Etapele reacţiei MLPA (Adaptare după Nucleic Acids Research, 2002, Vol. 30, No. 12)

Prin MLPA se pot detecta deleţiile mari (exonice, multiexonice şi ale intregii gene) care nu sunt
depistate prin secvenţiere . 3
Aplicaţiile MLPA în laboratorul nostru includ analiza deleţiilor/duplicaţiilor la nivelul genelor BRCA1,
BRCA2 (asociate cu cancerul ereditar de sân/ovar), MLH1 şi MSH2 (asociate cu cancerul colorectal
non-polipozic ereditar), APC (polipoza adenomatoasă familială), MEN1 (neoplazia endocrină multiplă
tip 1), HBB (asociată cu beta-talasemie), HBA1 (alfa-talasemie), CYP21A2 (asociată cu sindromul
adrenogenital – deficitul de 21-hidroxilază) etc .
4
II. Amplificarea bazată pe transcripţie (“transcription-based amplification”)
Include amplificarea mediată de transcripţie (“transcription-mediated amplification“ - TMA) şi
amplificarea bazată pe secvenţe de acizi nucleici (“nucleic-acid sequence-based amplification“ –
NASBA), care sunt tehnici de amplificare izotermală ce imită in vitro replicarea retrovirală, convertind
ARN-ul în ADN şi utilizând apoi ADN-ul ca matriţă pentru transcripţia unor copii multiple de ARN .
3
Reacţia NASBA se desfăşoară în următoarele etape:
121