Page 115 - Ghidul Serviciilor Medicale Synevo, Ediția 2, Volum 3

GHIDUL SERVICIILOR MEDICALE 18
AL LABORATOARELOR SYNEVO TESTE DE BIOLOGIE MOLECULARĂ

cromozomilor în celulele fetale obţinute din vilozităţile coriale la 10-12 săptămâni de sarcină
sau prin amniocenteză la 15-18 săptămâni, iar dacă carioptipul este 46XY, ADN-ul extras
din celulele fetale poate fi analizat pentru prezenţa mutaţiei sau pentru markerii informativi.
Dacă mutaţia nu este cunoscută, iar linkajul nu este informativ, diagnosticul prenatal este
posibil prin măsurarea activităţii coagulante a FVIII în sângele obţinut prin puncţia percutană
a cordonului ombilical la 18-21 săptamâni de sarcină (risc 1-6% de moarte fetală).
Specimen recoltat - sânge venos . 3
Recipient de recoltare - vacutainer ce conţine EDTA ca anticoagulant .
3
Cantitate recoltată - cât permite vacuumul .
3
Cauze de respingere a probei - folosirea heparinei ca anticoagulant .
3
Stabilitate probă - 7 zile la 2-8ºC . 3
Metodă - sunt disponibile două variante de testare:
- analiza inversiilor IVS1 şi IVS2 prin reacţie de polimerizare în lanţ (PCR) este prima
recomandată la pacienţii cu hemofilie A severă;
- hemofilia A panel extins: secvenţierea genei F8 şi analiza deleţiilor/duplicaţiilor prin MLPA,
la pacienţii cu hemofilie A severă la care nu se depistează una din cele două inversii,
precum şi la pacienţii cu hemofilie A uşoară sau moderată .
1,3
Interpretarea rezultatelor
Aproximativ 98% din pacienţii cu hemofilie A prezintă mutaţii la nivelul genei F8, fiind raportate peste
1000 mutaţii, incluzând deleţii, inserţii, mutaţiile punctiforme ale dinucleotidelor CpG fiind în mod
special comune. Deleţii largi (>50 nucleotide) apar la aproximativ 5% din pacienţii cu hemofilie A.
Aproximativ 40% din cazurile de hemofilie A severă rezultă dintr-o inversiune majoră a vârfului braţului
lung al cromozomului X, unul dintre punctele sale de ruptură (breakpoints) fiind situate la nivelul
intronului 22. O altă inversiune comună, la nivelul intronului 1, apare în 2-3% din deficienţele severe
de FVIII .
2;5
Gena F8A reprezintă o genă situată în interiorul genei FVIII, conţinută în întregime în intronul 22,
lipsită de introni şi fiind transcrisă în direcţie inversă faţă de FVIII. Cromozomul X conţine 3 copii
ale F8A şi regiunilor sale adiacente, una în intronul 22 şi două telomeric şi la ~500kb în amonte de
situsul de start al transcripţiei FVIII. Intronul 22 este neobişnuit din multe puncte de vedere. Este cel
mai mare intron al genei FVIII (32 kb) şi, de asemenea, conţine o insulă CpG localizată ~10kb în aval
de exonul 22, aceasta părând a servi ca promoter bidirecţional pentru F8A şi F8B (gena F8B este
de asemenea localizată în intronul 22 şi este transcrisă în direcţie inversă faţă de FVIII). Multe din
mutaţiile care rezultă în hemofilia A severă sunt bazate pe recombinarea dintre secvenţele omologe
F8A din intronul 22 şi din amonte de gena FVIII, ducând la inversiunea şi translocarea exonilor 1-22
faţă de exonii 23-26. Acest defect îşi are originea în principal în celulele germinale masculine, în
timpul diviziunii celulare meiotice, când lipsa unei formaţiuni bivalente facilitează “îndoirea” (“flipping”)
capătului telomeric al cromozomului X unic .
4,6

115