Page 178 - Ghidul Serviciilor Medicale Synevo, Ediția 2, Volum 3

18 TESTE DE BIOLOGIE MOLECULARĂ GHIDUL SERVICIILOR MEDICALE
AL LABORATOARELOR SYNEVO

EGFR dimer
Ligand
Anticorpi
moniclonali
P P PI3K Anti-EGFR
RAS
STAT PTEN P
RAF Akt
Molecule inhibitoare
ale EGFR Tirozin-kinazei
MEK mTOR
MAPK
Nucleu

Fig. 18.1.2.6 Căile de transducţie controlate de activarea EGFR şi blocarea terapeutică a EGFR;
activarea EGFR indusă de ligand duce la activarea a trei căi de transducţie importante, RAS-
MAPK, PI3K-Akt şi STAT, care controlează transcripţia, progresia, proliferarea celulară, adeziunea,
angiogeneza şi migrarea celulară. Anticorpii monoclonali anti-EGFR se leagă de domeniul specific
extracelular al receptorului, inhibă legarea ligandului şi automat activarea EGFR. Molecule inhibitoare
ale EGFR inhibă fosforilarea, activarea căilor de transducţie şi implicit proliferarea celulară (Adaptare
după Ensari et al.)
În cadrul testării mutaţiilor KRAS se folosesc în prima etapă tehnici de amplificare PCR; în funcţie de
ţesutul analizat, raportul ţesut tumoral versus ţesut sănătos este variabil şi heterogen, rezultând un
amestec al ţintei de amplificat în care ADN-ul mutant şi cel sălbatic nu sunt prezente într-un raport
echimolar. De aceea este important ca pentru genotipare ţesutul selectat să conţină suficient material
tumoral pentru analiză (mai mult de 70% celule de carcinom invaziv). Ulterior are loc secvenţierea
exonului 2 al genei KRAS în vederea detectării mutaţiilor .
2
Recomandări pentru analiza mutaţiilor genei KRAS
Analiza mutaţiilor genei KRAS contribuie semnificativ la selectarea pacienţilor care pot beneficia de
terapia cu anticorpi monoclonali anti–EGFR. Testul genetic se indică la pacienţii cu tumori metastatice
(stadiul IV) .
4;6
Specimen recoltat – secţiuni nefixate, necolorate din ţesut conservat în parafină (4-5 lame); cu
ajutorul unui marker cariocă vor fi evidenţiate zonele în care este prezent ţesutul tumoral .
3
Metodă - secvenţierea exonului 2 .
3
Raportarea rezultatelor
Va fi comunicată prezenţa sau absenţa unei mutaţii la nivelul codonului 12 sau 13 din exonul 2 al genei
KRAS în ADN-ul extras din ţesutul tumoral colonic .
3;4
Limite şi interferenţe
Nu toţi pacienţii care prezintă gena KRAS de tip sălbatic răspund la terapia anti-EGFR. Au fost descrise
polimorfisme rare care pot conduce la rezultate fals-pozitive sau fals-negative .
4
178