Page 433 - Ghidul Serviciilor Medicale Synevo, Ediția 2, Volum 3

GHIDUL SERVICIILOR MEDICALE 19
AL LABORATOARELOR SYNEVO ANALIZĂ CROMOZOMIALĂ

(CLL), leucemia mieloidă cronică (CML), neoplasmele mieloproliferative cronice şi sindroamele
mielodisplazice.
Măduva osoasă este proba preferată de analizat, cu excepţia CLL în care sângele periferic reprezintă
alternativa recomandată. Pe fiecare mL de mediu de cultură sunt aplicate aproximativ
1-3 x 10 celule care sunt cultivate timp de 24 şi 48 ore, după care celulele sunt expuse la Colcemid
6
înainte de a fi recoltate. Pentru acurateţea examenului citogenetic este necesar să fie examinate 10-
20 metafaze anormale sau 20-25 metafaze normale. În funcţie de contextul clinic pot fi recomandate
investigaţii suplimentare: FISH, RT-PCR, Southern blot .
3
Leucemia acută limfoblastică
Trebuie să se efectueze cel puţin 2 culturi, una timp de 24 ore şi cealaltă de 48 ore. Dacă există
suficientă probă, va fi efectuată şi o cultură de 72 ore. Înainte de recoltarea celulelor se recomandă
o expunere de 0.5-2 ore la Colcemid. Deoarece s-a demonstrat că tehnicile de sincronizare a ciclului
celular, concentraţiile crescute şi expunerea prelungită la Colcemid exercită un impact negativ asupra
analizei bandării cromozomiale (datorită „otrăvirii” celulelor), se recomandă să se utilizeze suplimentar
şi tehnica FISH.
Indicaţii de utilizare a sondelor FISH în ALL:
- pentru gena MLL în pro-B ALL (pre-pre B ALL, CD10 -) şi la toţi copiii <1 an;
- pentru gena de fuziune BCR-ABL1 în leucemia cu precursor de celulă B (BCP ALL);
- pentru gena de fuziune ETV6-RUNX1 în leucemia cu precursor de celulă B (BCP ALL) a
copilului;
- pentru cromozomii 4, 6, 8, 10, 14, 17, 18, 21 şi X în leucemia cu precursor de celulă B
(BCP ALL) a copilului;
- pentru gena MYC în leucemia cu celulă B matură (B-ALL);
- pentru genele CDKN2A, SIL-TAL1 şi NUP214-ABL1 în leucemia cu celulă T (T-ALL).
Dacă numărul de metafaze ce au putut fi examinate a fost <10 sau nu a fost detectată nici o anomalie
specifică, iar subtipul ALL este necunoscut, se recomandă toate aceste teste FISH .
3
Atât numărul cât şi alterările structurale ale cromozomilor reprezintă un element de prognostic
independent în ALL.
Astfel, copiii ai căror limfoblaşti prezintă hiperdiploidie (>50 cromozomi) au perioade mai lungi de
remisiune şi o rată mai bună de supravieţuire în comparaţie cu alte grupuri citogenetice. Mai mult,
hiperdiploidia înaltă (>53 cromozomi) este asociată cu o rată de recădere mult mai mică. Prognosticul
favorabil al hiperdiploidiei s-ar datora prezenţei simultane a trisomiilor 4 şi 10 sau a trisomiilor 4, 10
şi 17. Pe de altă parte, hipodiploidia severă (prezenţa unei clone cu <44 cromozomi) conferă un
prognostic nefavorabil, în ciuda tratamentului intensiv.
Translocaţiile cromozomiale clonale reprezintă un marker important de prognostic în ALL .
6
Un subset de ALL cu un prognostic nefavorabil, caracterizat prin recădere precoce după chimioterapie,
prezintă o translocaţie ce implică gena MLL (Mixed Lineage Leukemia, cunoscută şi ca HRX sau
ALL1) de pe segmentul cromozomial 11q23. În mod normal MLL controlează expresia genelor Hox
ce deţine un rol important în dezvoltarea hematopoetică. Deoarece translocaţiile MLL se găsesc în
mod specific în leucemiile copilului mic precum şi în leucemia indusă de chimioterapie, nu este clar

433